強(qiáng)力霉素對(duì)ox-LDL誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞損傷的保護(hù)作用及其與ADMA的關(guān)系.pdf

1、背景：非對(duì)稱二甲基精氨酸(Asymmetric Dimethylarginine，ADMA)是一種內(nèi)源性一氧化氮合酶(Nitric Oxide Synthase，NOS)抑制物。它能競(jìng)爭(zhēng)性抑制NOS，減少一氧化氮(Nitric Oxide，NO)生成。研究表明，ADMA促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化的形成，是一個(gè)新的心血管疾病危險(xiǎn)因子?；|(zhì)金屬蛋白酶(Matrix Metal-loproteinases，MMPs)是一類(lèi)Zn<'2+>依賴性蛋白水解酶

2、，能降解膠原和細(xì)胞外基質(zhì)，損害內(nèi)皮功能，對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展有重要影響。強(qiáng)力霉素是一類(lèi)四環(huán)素類(lèi)藥物，對(duì)MMPs具有廣譜的抑制作用。本實(shí)驗(yàn)擬通過(guò)觀察強(qiáng)力霉素對(duì)ox-LDL誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞MMP-2表達(dá)及ADMA水平的影響，初步探討其對(duì)ox-LDL誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞損傷的保護(hù)作用；并觀察ADMA對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞MMP-2蛋白表達(dá)及活性氧(Reactive Oxygen Species，ROS)水平的影響，初步探討ADMA對(duì)MMP-2蛋白表達(dá)的影響及機(jī)

3、制。 方法：實(shí)驗(yàn)分為三部分：(1)通過(guò)MTT法測(cè)定細(xì)胞生存率，觀察ox-LDL對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞損傷的量效關(guān)系(0，25，50，75，100，200 μg/ml，24 h)和時(shí)效關(guān)系(50μg/ml，12，24，48 h)；(2)觀察強(qiáng)力霉素對(duì)ox-LDL誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞MMP-2蛋白表達(dá)及ADMA水平的影響：用ox-LDL(50μg/ml)和不同濃度強(qiáng)力霉素(0，5，10，20，40μg/ml)共同孵育內(nèi)皮細(xì)胞24 h，分別測(cè)定細(xì)胞生存

4、率、ADMA水平(高效液相色譜法)以及MMP-2表達(dá)(western blot)；(3)觀察ADMA對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞MMP-2蛋白表達(dá)及ROS水平的影響：用不同濃度ADMA(0，1，3，10，30 μmol/L)孵育內(nèi)皮細(xì)胞24 h，分別測(cè)定細(xì)胞生存率、MMP-2蛋白表達(dá)以及ROS水平(熒光探針發(fā)光法)，并觀察細(xì)胞內(nèi)抗氧化劑PDTC(10μmol/L)和NOS底物L(fēng)-精氨酸(0.5mmol/L)對(duì)此的拮抗作用。 結(jié)果：(1)ox-LD

5、L呈濃度和時(shí)間依賴性降低內(nèi)皮細(xì)胞生存率；(2)與空白對(duì)照組相比，ox-LDL(50 μg/ml)顯著升高內(nèi)皮細(xì)胞ADMA與MMP-2蛋白表達(dá)水平(P<0.01)。強(qiáng)力霉素(5～20 μg/m1)能明顯抑制ox=LDL誘導(dǎo)的細(xì)胞生存率的降低，并顯著降低ox-LDL誘導(dǎo)的ADMA水平與MMP-2蛋白表達(dá)的升高(強(qiáng)力霉素5 μg/ml時(shí)P<0.05，強(qiáng)力霉素10，20 μg/ml時(shí)P<0.01)； (3)ADMA(3～30 μmol/L)呈濃

6、度依賴性降低內(nèi)皮細(xì)胞生存率(P<0.01)，并升高內(nèi)皮細(xì)胞ROS水平與MMP-2蛋白表達(dá)水平(ADMA 3μmol/L時(shí)P<0.05，ADMA 10，30 μmol/L時(shí)P<0.01)。L-精氨酸(0.5 mmol/L)或PDTC(10 μmol/L)均能取消30 μmol/LADMA所誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞ROS水平與MMP-2蛋白表達(dá)的升高(P<0.01)。 結(jié)論：(1)ox-LDL損傷內(nèi)皮細(xì)胞與誘導(dǎo)MMP-2蛋白表達(dá)有關(guān)；該過(guò)程可