PKCβ-Egr-1介導(dǎo)ox-LDL誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞炎癥應(yīng)激機(jī)制的研究.pdf

1、目的：研究ox-LDL對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞炎癥分子ICAM-1表達(dá)的影響,探究PKCβ/MAPKs/Egr-1信號(hào)通路在其中的可能調(diào)控機(jī)制。
　　方法：以人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株EA.hy926為研究對(duì)象，用不同劑量ox-LDL干預(yù)細(xì)胞6小時(shí)，蛋白印跡法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)ICAM-1表達(dá)量，摸索ox-LDL干預(yù)的最佳劑量。用此濃度ox-LDL作為后續(xù)實(shí)驗(yàn)干預(yù)劑量，分別干預(yù)細(xì)胞不同時(shí)間，蛋白印跡法檢測(cè)炎癥因子ICAM-1及信號(hào)分子PKCβⅡ、MAPKs磷酸

2、化及Egr-1蛋白表達(dá)情況，細(xì)胞免疫熒光法觀察細(xì)胞內(nèi)PKCβⅡ磷酸化水平變化，real-time PCR方法檢測(cè)Egr-1mRNA表達(dá)情況。為探討PKCβⅡ?qū)x-LD L誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞ICAM-1表達(dá)的調(diào)控作用，用100nmol/L PKCβ抑制劑LY333531預(yù)孵育細(xì)胞1h后加入10μg/ml ox-LDL刺激細(xì)胞，在MAPKs、Egr-1及ICAM-1表達(dá)高峰時(shí)間點(diǎn)分別檢測(cè)其磷酸化水平或表達(dá)情況。
　　結(jié)果：ox-LDL誘導(dǎo)

3、內(nèi)皮細(xì)胞ICAM-1表達(dá)存在濃度效應(yīng),10μg/ml ox-LDL對(duì)ICAM-1蛋白表達(dá)影響最顯著。10μg/ml ox-LDL誘導(dǎo)ICAM-1蛋白表達(dá)存在時(shí)間效應(yīng)，細(xì)胞干預(yù)6h后對(duì)ICAM-1蛋白表達(dá)影響最明顯，為對(duì)照組2.1倍（p<0.05）。10μg/ml ox-LDL可上調(diào)PKCβⅡ磷酸化水平,在15min致其磷酸化水平達(dá)對(duì)照組3.6倍（p<0.05）、致ERK1/2磷酸化水平分別在15min和45min達(dá)對(duì)照組1.4和1.5倍

4、（p<0.05）、致JNK磷酸化水平在30min達(dá)其對(duì)照組1.2倍（p<0.05）。而在10μg/mlox-LDL的刺激下，Egr-1mRNA及蛋白水平均在45 min時(shí)達(dá)高峰，其分別為對(duì)照組1.5、2.5倍（p<0.05）。應(yīng)用PKCβ抑制劑LY333531后ox-LDL誘導(dǎo)的PKCβⅡ磷酸化水平被抑制，LY333531減少了ox-LDL誘導(dǎo)的 ERK1/2/JNK磷酸化水平（25.1％和60%）、Egr-1 mRNA和蛋白表達(dá)（54