苯扎貝特對ox-LDL所誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞eNOS表達(dá)的影響及其機(jī)制.pdf

1、目的：體外培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)，用氧化型低密度脂蛋白(ox—LDL)干預(yù)后內(nèi)皮細(xì)胞受損，觀察其對內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)及血凝素樣氧化型低密度脂蛋白受體-1(LOX-1)表達(dá)的影響，研究過氧化物酶增生物激活受體α(PPARα)的配體苯扎貝特對ox—LDL作用后的內(nèi)皮細(xì)胞eNOS的影響并探討其機(jī)制。 方法：無菌培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞，采用形態(tài)學(xué)及抗Ⅷ因子抗體免疫熒光染色進(jìn)行內(nèi)皮細(xì)胞鑒定。選擇生長良好的第

2、4、5代細(xì)胞用于實驗。實驗分為5組：①對照組：DMEM培養(yǎng)基；②ox—LDL組：培養(yǎng)基中加入終濃度為50mg/L的ox—LDL孵育24h；③LOX-1阻滯劑組：終濃度250μg/mL多聚肌苷酸預(yù)先作用內(nèi)皮細(xì)胞2h，再加入終濃度為50μg/mLox—LDL培養(yǎng)24h。④苯扎貝特組：100μmol/L苯扎貝特預(yù)先作用內(nèi)皮細(xì)胞2h，再加入終濃度為50μg/mLox—LDL培養(yǎng)24h。⑤苯扎貝特+LOX-1阻滯劑組：終濃度250μg/mL多聚肌

3、苷酸預(yù)先作用內(nèi)皮細(xì)胞2h，再加入終濃度100μmol/L苯扎貝特預(yù)先作用內(nèi)皮細(xì)胞2h，最后加入終濃度為50μg/mLox—LDL培養(yǎng)24h。通過RT—PCR測定LOX-1、eNOSmRNA表達(dá)，Western—blot測定LOX-1、eNOS蛋白的表達(dá)。 結(jié)果： (1)正常細(xì)胞生長良好，倒置顯微鏡下觀察可見其呈鋪路石狀鑲嵌排列，細(xì)胞為扁平多角形，邊界清楚，胞漿豐富。人第Ⅷ因子相關(guān)抗原的SP免疫組化細(xì)胞漿內(nèi)染有棕黃色的染色

4、顆粒為陽性反應(yīng)，證實培養(yǎng)的細(xì)胞為內(nèi)皮細(xì)胞。 (2)正常對照組LOX-1表達(dá)為(mRNA：1.017±0.010，蛋白：5.132±0.210)，用50mg/Lox—LDL干預(yù)后LOX-1基因(1.521±0.015)和蛋白(6.317±0．245)表達(dá)較對照組明顯增加，有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0．05)；分別用終濃度250μg/mL多聚肌苷酸、100μmol/L苯扎貝特干預(yù)后LOX-1基因和蛋白表達(dá)較ox—LDL組明顯下降(mRNA分

5、別為：1.214±0．018，1.191±0．015，蛋白分別為：5.324±0.260，5.246±0．186，)有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；250μg/mL多聚肌苷酸+100μmol/L苯扎貝特組LOX-1表達(dá)(mRNA：0．948±0．014，蛋白：4.436±0.284)較100μmol/L苯扎貝特組明顯減少(P＜0．05)；各組間比較亦有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0．05)。 (3)正常對照組eNOS表達(dá)為(mRNA：1.18

6、8±0.091，蛋白：5.166±0.284)，用50mg/Lox—LDL干預(yù)后eNOS基因(0．917±0.093)和蛋白(4.591±0．282)表達(dá)較對照組明顯減少，有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0．05)；分別用終濃度250μg/mL多聚肌苷酸、100μmol/L苯扎貝特干預(yù)后eNOS基因和蛋白表達(dá)較ox—LDL組明顯增加(mRNA分別為：1.247±0.125，1.301±0.148，蛋白分別為：5.346±0.301，5.568±0.4

7、62)有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0．05)；250μg/mL多聚肌苷酸+100μmol/L苯扎貝特組eNOS表達(dá)(mRNA：1.527±0.160，蛋白：6.424±0.245)較100μmol/L苯扎貝特組明顯增加(P＜0．05)；各組間比較亦有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0．05)。 結(jié)論： (1)證實ox—LDL可引起內(nèi)皮細(xì)胞eNOS表達(dá)減少及Lox-1表達(dá)增加，而使內(nèi)皮細(xì)胞損傷。 (2)苯扎貝特可上調(diào)eNOS基因和蛋白的表達(dá)