綠原酸的定量、類似物及衍生物的制備和生物活性研究.pdf

1、綠原酸是自然界廣泛存在并具有多種生物活性的天然產(chǎn)物，其含量是中藥茵陳質(zhì)量控制的重要指標(biāo)。茵陳為菊科植物茵陳蒿或?yàn)I蒿的地上干燥部分，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，具有清熱利濕、利膽退黃的功效，現(xiàn)代藥理研究證實(shí)其還具有抗癌、抗炎和解熱鎮(zhèn)痛作用。中藥茵陳中含有綠原酸類、黃酮類及香豆素類等多種化學(xué)成分。本文建立了超高效液相色譜-串聯(lián)四極桿質(zhì)譜聯(lián)用法(UPLC-MS/MS)以同時(shí)快速分析茵陳中包括綠原酸在內(nèi)的6種成分的含量，并比較了不同采收時(shí)間、不同采集

2、部位及不同干燥方式處理后樣品中6種成分含量的變化，結(jié)果表明:茵陳藥材中綠原酸的含量顯著高于其它黃酮化合物。此外，在不同月份采集的樣品中，綠原酸含量的分布規(guī)律均呈現(xiàn):葉＞莖＞根，冷凍干燥處理＞蔭干處理，其中4月采集樣品經(jīng)冷凍干燥處理后葉中綠原酸含量最高，為10.823μg/mg。其他5種黃酮成分的含量變化如3，5，3'，4'-四羥基-6，7-二甲氧基黃酮的含量在6月冷凍干燥樣品葉中含量最高;3'-甲氧基薊黃素及薊黃素在茵陳葉中的含量隨著時(shí)

3、間的推移逐漸升高;而金圣草黃素和鼠李檸檬素在茵陳藥材中的含量很低。此次建立的同時(shí)快速分析茵陳中包括綠原酸在內(nèi)的6種成分的方法靈敏度和分辨率高、穩(wěn)定性強(qiáng)，為茵陳藥材質(zhì)量控制提供了可借鑒的分析方法。
　　由于綠原酸分子結(jié)構(gòu)中存在5個(gè)酚羥基和一個(gè)羧基，因此具有很高的親水性和較低的親脂性。本實(shí)驗(yàn)采用生物轉(zhuǎn)化技術(shù)在改善綠原酸的親脂性方面做了研究。利用豬胰脂肪酶催化完成了綠原酸乙?；姆磻?yīng)，并摸索出該酶催化綠原酸乙酰化反應(yīng)的最適反應(yīng)條件，即選

4、取甲基叔丁基醚作為反應(yīng)溶劑，乙酸乙烯酯作為酰基供體，在綠原酸∶乙酸乙烯酯=1∶6，脂肪酶100 mg，50℃條件下，綠原酸的乙?；a(chǎn)率最高。此外，將酶催化反應(yīng)混合物用ODS進(jìn)行分離純化，通過(guò)UPLC-MS/MS定性分析以及NMR結(jié)構(gòu)確定，最終得到綠原酸的兩種乙?；锛?-乙酰綠原酸和1，5-二乙酰綠原酸。
　　多年研究證明綠原酸具有很強(qiáng)的生物活性，但是由于其結(jié)構(gòu)特殊性——酯鍵的存在，使其口服后僅有一小部分可以被完全吸收，而很大一部

5、分在體內(nèi)水解，水解后的綠原酸許多生物活性消失。因此，迫切需要研究合成穩(wěn)定性更高的綠原酸類似物。本研究以奎尼酸二縮丙酮為起始原料，經(jīng)過(guò)氧化、羥氨化、催化氫化、?；却罅繉?shí)驗(yàn)研究，合成了穩(wěn)定性更高的綠原酸類似物，經(jīng)過(guò)包括NOE在內(nèi)的NMR分析、以及高分辨質(zhì)譜的檢測(cè)，鑒定為3α-咖啡?？崴狨０罚摶衔锊粌H保留了綠原酸的抗氧化活性和抗HCV病毒活性，同時(shí)還有較高的穩(wěn)定性和較低的毒性。
　　為了驗(yàn)證綠原酸類似物及衍生物的生物活性，找到活

6、性更優(yōu)的天然產(chǎn)物的類似物及衍生物，本文比較了6種化合物在清除DPPH自由基活性、抑制細(xì)胞內(nèi)活性氧活性、過(guò)氧游離基誘導(dǎo)DNA氧化損傷的保護(hù)作用、抑制α-葡萄糖苷酶活性以及抑制二肽基肽酶活性等五個(gè)方面的活性。研究結(jié)果表明:綠原酸類似物3α-咖啡酰奎尼酸酰胺在抑制細(xì)胞內(nèi)活性氧活性方面優(yōu)于綠原酸，同時(shí)3α-咖啡?？崴狨０?、1-乙酰綠原酸和1，5-二乙酰綠原酸對(duì)過(guò)氧游離基誘導(dǎo)的DNA氧化損傷的保護(hù)作用也強(qiáng)于綠原酸。
　　盡管上述化合物在離