褪黑素對大鼠脊髓損傷GAP-43、BDNF表達的影響.pdf

1、背景與目的:
　　 脊髓損傷(spinal cord injury，SCI)是一種嚴重的中樞神經(jīng)系統(tǒng)創(chuàng)傷性疾病，可導致患者出現(xiàn)嚴重的運動及感覺功能障礙。其修復一直是困擾人類健康的難題，治療并促進SCI康復的方法主要是靠藥物治療和外科手術(shù)治療，但均未取得令人滿意的療效。脊髓損傷的重要問題是上、下行傳導神經(jīng)纖維束的斷裂，導致神經(jīng)通路的中斷。因此修復的主要問題表現(xiàn)在近段軸突能不能向下延展生長并形成功能型連接。褪黑素是由松果體產(chǎn)生的一種

2、胺類激素，研究表明其可通過清除自由基、抑制脂質(zhì)過氧化反應、減輕細胞損傷和凋亡、減輕中性粒細胞介導的毒性損害等機制修復脊髓損傷，但其是否可通過提高GAP-43、BDNF的含量以修復脊髓損傷目前尚少見報道。本實驗旨在通過檢測血清中GAP-43、BDNF的含量和脊髓中GAP-43、BDNF的表達，進一步明確褪黑素治療脊髓損傷的機制，為臨床用藥提供實驗依據(jù)。
　　 材料與方法:
　　 90只SD大鼠隨機分為3組:褪黑素治療組（A

3、組，n=30）、脊髓損傷組(B組，n=30)、假手術(shù)組（C組，n=30）。A、B兩組以改良Allen's法（打擊量50gcf）建立T11-T12水平損傷模型。A組于術(shù)后10 min按體重腹腔注射褪黑素100mg/kg，B組則按體重腹腔注射等體積的5％無水乙醇（MT的溶劑），C組只切除T11-T12棘突及椎板而不損傷脊髓。分別于術(shù)后1、3、7d對各組大鼠進行BBB運動功能評分，取血液檢測BDNF、GAP-43含量，應用RT-PCR法檢測損

4、傷段脊髓BDNF mRNA及GAP-43 mRNA的表達水平，并應用免疫組化法觀察脊髓中BDNF、GAP-43的表達特點，應用HE染色法觀察其一般病理變化。采用SPSS17.0統(tǒng)計分析軟件進行數(shù)據(jù)分析，以x±s表示計量資料，多組間比較采用單因素方差分析(ANOVA)，各組方差具有齊性時，組間比較采用t(LSD-t)檢驗，各組方差不齊時，采用Tamhane's T2檢驗，以P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。
　　 結(jié)果:

5、　　 1.術(shù)后1、3、7d大鼠血清中BDNF、GAP-43含量及脊髓內(nèi)BDNF、GAP-43mRNA表達水平各組間比較均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，其中褪黑素組最高，脊髓損傷組次之，假手術(shù)組最低。
　　 2.A、B兩組大鼠于術(shù)后均出現(xiàn)了嚴重的下肢神經(jīng)功能障礙，兩組的BBB運動功能評分較C組明顯降低，差異均顯著(P＜0.05);A、B兩組比較，在損傷后第1、3天其差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），兩組大鼠后肢運動功能無明顯恢復

6、，但在損傷后第7天，兩組間差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　 3.免疫熒光組織化學染色結(jié)果表明:褪黑素組脊髓切片中BDNF、GAP-43染色陽性細胞數(shù)最多，脊髓損傷組次之，假手術(shù)組最低，各組間比較有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1.褪黑素治療后可改變脊髓損傷區(qū)局部的微環(huán)境，并通過上調(diào)BDNF、GAP-43mRNA的表達修復脊髓損傷。
　　 2.病理學觀察表明褪黑素可降低大鼠脊髓損