miR-495基因啟動子甲基化對胃癌細胞的PRL-3基因表達影響研究.pdf

1、分類號：密級：UDC：學號：416523212193南昌大學碩士研究生學位論文miR495基因啟動子甲基化對胃癌細胞的基因啟動子甲基化對胃癌細胞的PRL3基因基因表達影響研究表達影響研究miR495genepromotermethylationonPRL3expressioningastriccancercell張國陽張國陽培養(yǎng)單位（院、系）：南昌大學第一附屬醫(yī)院指導教師姓名、職稱：揭志剛教授主任醫(yī)師申請學位的學科門類：醫(yī)學學科專業(yè)名稱

2、：外科學（普外）論文答辯日期：2015年5月答辯委員會主席：朱培謙評閱人：孫明生曾慶黎2015年5月摘要II摘要目的：目的：探討在胃癌腹膜侵襲轉(zhuǎn)移中靶向調(diào)控PRL3的內(nèi)源性micrNA分子miR495基因上游CpG島甲基化對胃癌細胞的PRL3基因表達影響。方法：方法：培養(yǎng)2株正常胃黏膜上皮細胞系（GES1和HFE145）和4株轉(zhuǎn)移潛能不同的胃癌細胞系（MKN28SGC7901MKN45BGC823），用WesternBlot方法檢測細胞

3、中PRL3蛋白水平，用qRTPCR技術(shù)檢測細胞中miR495表達情況，通過甲基化特異性PCR（MSP）及亞硫酸氫鈉測序法(bisulfitegenomicsequencing，BSP)檢測miR495基因啟動子甲基化水平，Transwell小室實驗檢測4種腫瘤細胞侵襲及轉(zhuǎn)移能力。利用不同濃度（0uM、1uM、5uM、10uM）的DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑5氮雜胞苷2’脫氧胞苷(5aza2’dc)處理后，37℃、5%CO2的孵箱繼續(xù)孵育48小

4、時，同樣利用以上方法測定PRL3蛋白水平、miR495表達情況、miR495基因啟動子甲基化水平以及腫瘤細胞侵襲及轉(zhuǎn)移能力的變化。結(jié)果：結(jié)果：胃癌細胞在DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑5氮雜胞苷2’脫氧胞苷去甲基化處理后，miR495表達均明顯增加，且明顯抑制了PRL3蛋白及mRNA的表達，Transwell侵襲遷移實驗表明，胃癌細胞在去甲基化處理后，侵襲和遷移能力均明顯下降。結(jié)論：結(jié)論：在胃癌腹膜侵襲轉(zhuǎn)移中靶向調(diào)控PRL3的內(nèi)源性micrNA分