阿里紅提取物對(duì)Aβ25-35誘導(dǎo)大鼠及PC12細(xì)胞癡呆模型保護(hù)作用機(jī)制的研究.pdf

1、目的：通過(guò)觀察阿里紅提取物對(duì)大鼠腎上腺嗜絡(luò)瘤細(xì)胞（PC12）增殖的影響；研究阿里紅提取物對(duì)β-淀粉樣蛋白（Aβ25-35）誘導(dǎo)PC12細(xì)胞損傷的保護(hù)作用及其對(duì)Aβ25-35所致阿爾茨海默病模型大鼠學(xué)習(xí)記憶障礙、膽堿能系統(tǒng)損害的影響，以探討阿里紅提取物是否具有神經(jīng)保護(hù)作用。
　　方法：1）在體外實(shí)驗(yàn)中，采用MTT法篩選出對(duì) PC12細(xì)胞增殖活性部位。2）Aβ25-35誘導(dǎo) PC12細(xì)胞損傷建立阿爾茨海默病體外模型；將培養(yǎng)的PC12細(xì)

2、胞分為五組：正常對(duì)照組，模型組（Aβ25-35損傷組），藥物低劑量組（50μg/mL），藥物中劑量組（100μg/mL），藥物高劑量組（200μg/mL），用MTT法檢測(cè)PC12細(xì)胞的存活率；AinexinV-FITC/7-AAD雙染法流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡；采用RT-PCR法檢測(cè)bax和bcl-2基因mRNA的表達(dá)水平；Western blot法檢測(cè)bax和bcl-2蛋白表達(dá)變化。3）在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，將凝聚狀態(tài)的Aβ25-35（11.5

3、μ mol/L）注入大鼠側(cè)腦海馬區(qū)建立大鼠AD模型，采用Morris水迷宮法檢測(cè)各組大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的改變；采用HE染色法觀察各組大鼠神經(jīng)元病理形態(tài)的改變；采用生化法檢測(cè)各組大鼠腦組織勻漿中 AchE活性的變化；采用免疫組化法檢測(cè)大鼠大腦組織ChAT表達(dá)的變化。結(jié)果：1）阿里紅乙酸乙酯部位可促進(jìn)PC12細(xì)胞的增殖，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；2）與模型組比較，給予阿里紅乙酸乙酯部位處理后的Aβ25-35組，細(xì)胞存活率升高（64.

4、36±4.00）％、細(xì)胞凋亡率降低（6.1%），RT-PCR結(jié)果顯示，bax基因mRNA表達(dá)水平明顯降低，bcl-2基因mRNA表達(dá)水平明顯增高；Western blot結(jié)果顯示，Bax蛋白表達(dá)降低，Bcl-2蛋白表達(dá)增強(qiáng)；3）與模型組比較，阿里紅提取物乙酸乙酯部位高、中、低劑量組大鼠逃逸潛伏期明顯縮短，目標(biāo)象限停留時(shí)間均明顯延長(zhǎng)，穿越平臺(tái)次數(shù)增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；海馬神經(jīng)細(xì)胞數(shù)量明顯增多，同時(shí)明顯降低腦組織勻漿中的