黃酮類化合物CJY對β-淀粉樣蛋白25-35介導(dǎo)的PC12細(xì)胞損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　 探討黃酮類化合物(flavanoid，CJY)對β-淀粉樣蛋白25-35(beta-amyloid protein25-35，Aβ25-35)誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞(大鼠嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞，pheochromocytoma cell)氧化損傷的保護(hù)作用及其可能機(jī)制。
　　 方法：
　　 應(yīng)用不同濃度的H2O2(100,300,500,700,1000μM)對PC12細(xì)胞進(jìn)行損傷，通過倒置顯微鏡觀察細(xì)胞的形態(tài)

2、，MTT法測定PC12細(xì)胞的損傷率，確定出引起細(xì)胞損傷的最佳損傷濃度和最佳損傷時(shí)間，研究黃酮類化合物和對照品維生素E對H2O2誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞損傷的保護(hù)作用。應(yīng)用不同濃度的Aβ25-35(1，10,20,30,50μM)對PC12細(xì)胞進(jìn)行損傷，通過倒置顯微鏡觀察細(xì)胞的形態(tài)，MTT法測定PC12細(xì)胞的損傷率和存活率，確定出引起細(xì)胞損傷的最佳損傷濃度和最佳損傷時(shí)間；采用NOS和SOD試劑盒檢測Aβ25-35對PC12細(xì)胞的氧化損傷，并研究

3、黃酮類化合物的抗氧化作用及其機(jī)制，使用DCH-DA結(jié)合活細(xì)胞高內(nèi)涵成像系統(tǒng)檢測細(xì)胞內(nèi)ROS的水平，進(jìn)一步探討黃酮類化合物的抗氧化損傷的作用機(jī)制；采用吖啶橙(Acridine Orange，AO)和溴化乙錠(Ethidium bromide，EB)雙染色法結(jié)合熒光顯微鏡觀察細(xì)胞凋亡形態(tài)；Rh123結(jié)合活細(xì)胞高內(nèi)涵成像系統(tǒng)檢測細(xì)胞線粒體膜電位的變化；采用鈣離子敏感的熒光探針Fura-2/AM檢測細(xì)胞內(nèi)游離Ca2+濃度，采用Western B

4、lot測定活化Caspase-3的表達(dá)，進(jìn)一步研究黃酮類化合物對細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用的可能機(jī)制。
　　 結(jié)果：
　　 1，經(jīng)終濃度為500μM的H2O2與PC12細(xì)胞共同培養(yǎng)24小時(shí)后，可顯著降低細(xì)胞的存活率，而終濃度為5μM，10μM，50μM的黃酮類化合物可明顯改善損傷細(xì)胞形態(tài)，顯著提高PC12細(xì)胞的存活率，并呈濃度依賴性。
　　 2，經(jīng)終濃度為10μM的凝聚態(tài)Aβ25-35與PC12細(xì)胞共同培養(yǎng)24小時(shí)后，可

5、顯著降低細(xì)胞的存活率，而濃度為5μM，10μM，50μM的黃酮類化合物可明顯改善細(xì)胞形態(tài)，顯著提高PC12細(xì)胞的存活率，并呈濃度依賴性。
　　 3，Aβ25-35可觸發(fā)細(xì)胞內(nèi)的氧化應(yīng)激反應(yīng)，造成細(xì)胞氧化損傷，提高細(xì)胞內(nèi)ROS水平，顯著降低細(xì)胞內(nèi)SOD的活性，提高NOS活性；黃酮類化合物則顯著降低細(xì)胞內(nèi)ROS水平，升高SOD的活性，降低NOS的活性，具有明顯的抗氧化損傷作用。
　　 4，PC12細(xì)胞經(jīng)10μM的Aβ25-3