槲皮素對(duì)H2O2所致PC12細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)效果與機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　研究槲皮素(Quercetin)對(duì)PC12細(xì)胞增殖的影響以及防止H2O2氧化損傷PC12細(xì)胞的保護(hù)效果，同時(shí)初步探討其作用機(jī)制。
　　方法：
　　通過MTT比色法檢測(cè)槲皮素對(duì)PC12細(xì)胞增殖的影響。同時(shí)用H2O2誘導(dǎo)PC12細(xì)胞建立氧化損傷模型，通過MTT和LDH比色法檢測(cè)槲皮素對(duì)H2O2誘導(dǎo)PC12細(xì)胞損傷的細(xì)胞存活率的影響，進(jìn)一步確定槲皮素的保護(hù)效果;通過Hoechst-33342染色、PI染色和TUN

2、EL法檢測(cè)槲皮素防止PC12細(xì)胞和海馬神經(jīng)元遭受H2O2損傷在細(xì)胞形態(tài)上的變化特征和通過流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測(cè)槲皮素對(duì)PC12細(xì)胞凋亡情況的影響。在槲皮素的保護(hù)機(jī)制研究中，首先對(duì)比檢測(cè)槲皮素對(duì)PC12細(xì)胞內(nèi)ROS水平和MDA的含量，同時(shí)檢測(cè)PC12細(xì)胞內(nèi)抗氧化酶系中SOD、CAT、GSH-PX的活性，討論槲皮素對(duì)遭受氧化應(yīng)激的PC12細(xì)胞內(nèi)氧化與抗氧化系統(tǒng)之間的平衡的影響;再通過western-blotting免疫印跡法檢測(cè)槲皮素保護(hù)

3、PC12細(xì)胞抵抗H2O2氧化損傷時(shí)，細(xì)胞內(nèi)Caspase-3、Bcl-2、Bax和P53等調(diào)控細(xì)胞凋亡的相關(guān)因子的表達(dá)情況，從而初步探討槲皮素發(fā)揮保護(hù)作用的機(jī)制。
　　結(jié)果：
　　(1)、在一定濃度范圍內(nèi)，檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)槲皮素對(duì)PC12細(xì)胞沒有細(xì)胞毒性作用。
　　(2)、經(jīng)過MTT法和LDH法檢測(cè)得出槲皮素能夠明顯的降低H2O2誘導(dǎo)PC12細(xì)胞產(chǎn)生的氧化損傷。
　　(3)、通過形態(tài)學(xué)的研究得出槲皮素能增強(qiáng)PC12細(xì)

4、胞對(duì)H2O2誘導(dǎo)損傷的承受能力，減少細(xì)胞核濃縮和邊緣化以及凋亡小體出現(xiàn)等細(xì)胞凋亡的表征現(xiàn)象發(fā)生，也能減少H2O2所致海馬神經(jīng)元凋亡。
　　(4)、通過對(duì)細(xì)胞內(nèi)氧化與抗氧化物的檢測(cè)得出槲皮素能夠提高細(xì)胞內(nèi)SOD、CAT和GSH-PX等抗氧化酶活性，降低細(xì)胞內(nèi)ROS水平，減少M(fèi)DA產(chǎn)生，削弱H2O2對(duì)PC12細(xì)胞的氧化損傷。
　　(5)、對(duì)PC12細(xì)胞內(nèi)凋亡相關(guān)因子表達(dá)量的檢測(cè)發(fā)現(xiàn)槲皮素能夠抑制酶原型Caspase-3裂解和Ba

5、x、p53等凋亡蛋白的表達(dá)，且提高Bcl-2抗凋亡蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)論：
　　本研究得出，槲皮素對(duì)PC12細(xì)胞沒有毒性，且能夠減弱H2O2誘導(dǎo)PC12細(xì)胞和海馬神經(jīng)元發(fā)生氧化損傷，改善細(xì)胞凋亡表征現(xiàn)象的發(fā)生。其可能的機(jī)制為:槲皮素通過增加SOD、CAT和GSH-PX等抗氧化酶系，降低因H2O2誘導(dǎo)產(chǎn)生的ROS，進(jìn)一步減少胞內(nèi)脂質(zhì)過氧化生成MDA;此外，槲皮素發(fā)揮保護(hù)作用的機(jī)制還可能通過抑制細(xì)胞凋亡觸發(fā)因子（如ROS）激活C