SHBG基因敲除小鼠模型的建立及其表型分析.pdf

1、目的:建立性激素結(jié)合球蛋白基因敲除小鼠模型，對其進(jìn)行初步表型分析，為探究性激素結(jié)合球蛋白在體內(nèi)的生理功能及其與妊娠期糖尿病的關(guān)系提供實(shí)驗(yàn)手段。
　　方法:首先運(yùn)用生物信息學(xué)手段確定小鼠SHBG基因組序列，構(gòu)建SHBG打靶載體，以電穿孔方法將其導(dǎo)入小鼠ES細(xì)胞，篩選培養(yǎng)陽性ES細(xì)胞并行PCR鑒定，并將正確同源重組的ES細(xì)胞注射進(jìn)小鼠囊胚，移入受體小鼠子宮;將獲得的嵌合體小鼠與C57BL/6J小鼠交配，篩選后獲得Flox小鼠，該小鼠通

2、過與Flp鼠及C57BL/6J小鼠交配去除干擾基因獲得SHBGCKO鼠，后與EIIa-Cre轉(zhuǎn)基因小鼠雜交，子代多次自交獲得SHBG全身基因敲除(SHBG-/-)的小鼠。PCR法鑒定子代基因型。測定并比較不同基因型8周齡雌性小鼠的體重及糖耐量水平。
　　結(jié)果:運(yùn)用同源重組及ES細(xì)胞技術(shù)建立了SHBG基因的Flox小鼠，并利用Cre/Loxp重組酶系統(tǒng)建立了SHBG基因全身敲除小鼠模型，PCR方法從基因水平證明了SHBG基因Flox

3、小鼠及SHBG基因全身敲除小鼠模型建立成功。對基因敲除鼠進(jìn)行初步表型分析發(fā)現(xiàn):SHBG基因全身敲除小鼠的生長發(fā)育與野生型小鼠相比無明顯肉眼所見異常，SHBG基因全身敲除雌雄小鼠均具有生殖能力。不同基因型空腹體重差異及糖耐量水平差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論:成功建立SHBG基因全身敲除小鼠模型，通過對基因敲除鼠進(jìn)行初步表型分析，發(fā)現(xiàn)SHBG基因全身敲除小鼠外觀上發(fā)育正常。常規(guī)飲食條件下，體重與糖耐量差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意