FAM83D促進肺腺癌惡性進展及其機制研究.pdf

1、第一部分:FAM83D在肺腺癌中的表達特征及臨床意義的探索
　　[目的]肺癌是目前世界上發(fā)病人數(shù)及死亡人數(shù)最多的惡性腫瘤。近年來，肺腺癌發(fā)病率增長迅速，甚至已超過肺鱗癌成為非小細胞肺癌最主要的病理類型。有研究表明，F(xiàn)AM83家族（Family with sequence similarity83）與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展相關。本研究旨在探索FAM83D成員在肺腺癌中的表達情況，并分析其表達與臨床病理分期間的關系以及與肺腺癌患者預后之間

2、的相關性。
　　[方法]應用腫瘤基因組圖譜(the cancer genome atlas，TCGA)肺腺癌數(shù)據(jù)庫驗證FAM83D在肺腺癌組織中表達顯著高于癌旁正常組織，且運用Cox回歸分析探索了FAM83D表達與肺腺癌患者總體生存之間的關系。后選取了江蘇省腫瘤醫(yī)院胸外科60例肺腺癌和癌旁正常組織標本，使用實時熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(qRT-PCR)方法與免疫組化（Immunohistochemistry，IHC）染色的方法

3、檢測FAM83D的表達情況并分析其表達與臨床病理表現(xiàn)的關系。
　　[結果]TCGA肺腺癌數(shù)據(jù)庫分析結果顯示:FAM83D在肺腺癌組織中的表達顯著高于對應的癌旁正常肺組織，卡方檢驗顯示FAM83D高表達與年齡沒有相關性(p=0.3164)，但與更大的原發(fā)腫瘤(p＜0.0001)、淋巴結轉(zhuǎn)移(p=0.0049)以及更高的TNM分期(p＜0.0001)正相關。Kaplan-Meier生存分析顯示，腫瘤組織FAM83D高表達相較于低表達組

4、，生存明顯下降(HR=1.890，p=0.0003)。綜合FAM83D表達水平、性別、T分期、N分期以及TNM分期等臨床參數(shù)，多因素Cox回歸分析提示，F(xiàn)AM83D高表達(p=0.006)與更高階的TNM分期(p=0.012)是兩個影響肺腺癌病人總體生存的獨立危險因素。
　　[結論]FAM83D在肺腺癌組織中高表達，且肺腺癌組織FAM83D高表達提示著不良的預后。FAM83D可能參與了肺腺癌的惡性進展。
　　第二部分:FAM

5、83D在肺腺癌中體內(nèi)外功能實驗和相關機制的探索
　　[目的]
　　FAM83D可能是一個潛在的促進肺腺癌惡性表型的促癌基因。本研究旨在探討FAM83D蛋白在肺腺癌中的表達，并分析其與肺腺癌惡性表型的關系及其潛在的調(diào)控機制，為肺腺癌的臨床治療提供新的靶點。
　　[方法]
　　1.使用qRT-PCR方法和western blot法分別檢測肺腺癌細胞系中FAM83D的mRNA和蛋白的表達情況。
　　2.設計特異s

6、iRNA干擾FAM83D的表達，體外功能實驗探討FAM83D對腫瘤增殖、遷移能力及細胞周期、凋亡的影響。
　　3.體內(nèi)裸小鼠移植瘤模型實驗觀察FAM83D的干擾對肺腺癌細胞在裸小鼠皮下生長的影響。
　　4.運用KEGG通路分析及GO富集分析預測FAM83D發(fā)揮作用的可能通路。
　　5.使用qRT-PCR方法和western blot法檢測沉默F(xiàn)AM83D后相關細胞周期蛋白的的mRNA和蛋白的表達情況變化。
　　6

7、.進行拯救實驗進一步驗證FAM83D與潛在靶基因的上下游關系。
　　[結果]
　　1.FAM83D在肺腺癌細胞系的表達明顯高于肺上皮正常細胞。沉默F(xiàn)AM83D后A549和H1299細胞株的增殖、遷移和侵襲能力明顯降低，并使細胞周期阻滯在G1期。
　　2.裸小鼠荷瘤實驗顯示，沉默F(xiàn)AM83D后腫瘤的生長速度及體積均小于對照組。對移植瘤進行免疫組化染色顯示，沉默F(xiàn)AM83D的實驗組的Ki-67染色低于對照組(p＜0.05)

8、。
　　3.qRT-PCR和western blot結果顯示，沉默F(xiàn)AM83D后，細胞周期蛋白CCND1與CCNE1的表達也受到了明顯的抑制，而其它的細胞周期調(diào)控基因的表達沒有顯著差異。
　　4.在沉默F(xiàn)AM83D的肺腺癌細胞中過表達CCND1或CCNE1可以部分拯救減弱的惡性表型。
　　[結論]
　　我們的實驗結果顯示FAM83D在肺腺癌細胞系中高表達，可促進肺腺癌細胞的增殖和遷移侵襲能力。FAM83D可能通過