細(xì)胞周期相關(guān)蛋白ZYG11A促進(jìn)肺腺癌惡性進(jìn)展的機(jī)制研究.pdf

1、本文通過以下幾個(gè)部分展開論述：
　　第一部分:ZYG11A在非小細(xì)胞肺癌中被識(shí)別為一個(gè)潛在的癌基因
　　目的:肺癌目前是全世界最流行的腫瘤，每年造成大量患者死亡。即使患者接受了規(guī)范化治療，在大多數(shù)國家里五年生存率仍然小于15％。因此尋找肺癌相關(guān)標(biāo)記物和治療靶點(diǎn)顯得尤為重要。近年來隨著高通量測序技術(shù)的發(fā)展與普及，以及許多公開腫瘤學(xué)數(shù)據(jù)庫的涌現(xiàn)，使得這項(xiàng)工作顯得更為方便簡單。
　　方法:通過使用TCGA的肺癌，肺腺癌，肺鱗

2、癌數(shù)據(jù)庫從約20000個(gè)基因中篩選差異表達(dá)最大的基因。對(duì)于腫瘤和瘤旁差異表達(dá)大于5倍的和腫瘤中表達(dá)大于3的基因再進(jìn)行文獻(xiàn)閱讀篩選。之后使用The Human Protein Atlas評(píng)估篩選出來的基因在組織中蛋白表達(dá)情況。
　　結(jié)果:通過TCGA數(shù)據(jù)庫的篩選，我們一共識(shí)別出了7個(gè)符合條件的基因，通過在PubMed和谷歌學(xué)術(shù)上檢索我們發(fā)現(xiàn)PITX2，HOXC13和BARX1都屬于轉(zhuǎn)錄因子，并且在腫瘤中已經(jīng)被很好的研究過了。DLL3

3、作為一個(gè)Notch的配體在腫瘤中也被研究過了。LOC100131726是一個(gè)長鏈非編碼RNA。IL1F5屬于白介素1家族在牛皮癬的發(fā)病中被廣泛研究。只有ZYG11A目前被研究甚少。
　　第二部分:ZYG11A在非小細(xì)胞肺癌中的體內(nèi)外功能實(shí)驗(yàn)和相關(guān)機(jī)制探索
　　目的:根據(jù)之前的分析，ZYG11A可能是一個(gè)潛在的癌基因，本研究旨在探索ZYG11A和非小細(xì)胞肺癌相關(guān)惡性表型的關(guān)系及其可能機(jī)制，為肺癌防治提供潛在新靶點(diǎn)。
　　

4、方法:首先使用qRT-PCR和Western blot檢測ZYG11A在各個(gè)細(xì)胞中的表達(dá)情況，并選擇合適的細(xì)胞系進(jìn)一步進(jìn)行相關(guān)表型研究。我們選擇H1299和SPC-A-1進(jìn)行了相關(guān)的體內(nèi)外表型研究。設(shè)計(jì)特異性siRNA干擾ZYG11A的表達(dá)，之后檢測細(xì)胞的增殖，遷移，侵襲能力，以及凋亡情況和細(xì)胞周期分布。
　　結(jié)果:我們發(fā)現(xiàn)在體內(nèi)外干擾ZYG11A的表達(dá)可以顯著的抑制腫瘤細(xì)胞的相關(guān)惡性表型，影響到CCNE1的表達(dá)，從而導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞

5、的G1期阻滯，我們通過拯救試驗(yàn)過表達(dá)CCNE1可以恢復(fù)腫瘤的相關(guān)惡性表型。
　　第三部分:ZYG11A在非小細(xì)胞肺癌中的預(yù)后價(jià)值
　　目的:探索ZYG11A在肺癌中是否可以作為一個(gè)獨(dú)立的預(yù)后因素，并且探索ZYG11A和其他臨床參數(shù)之間的相關(guān)性。
　　方法:我們使用了90對(duì)來自于上海芯超公司的非小細(xì)胞肺癌組織芯片進(jìn)行ZYG11A的免疫組織化學(xué)染色。染色后對(duì)染色結(jié)果進(jìn)行評(píng)分，然后運(yùn)用相關(guān)的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法探索ZYG11A的表達(dá)和