竹蓀多糖的圖譜分析及對砷致肝損傷的干預(yù)作用機制研究.pdf

1、目的：
　　1.竹蓀多糖圖譜分析：定性和定量分析竹蓀子實體及菌托多糖中所含單糖種類與含量以及此兩種多糖血清圖譜；
　　2.竹蓀多糖對NaAsO2染毒L-02肝細胞干預(yù)作用：利用基因芯片技術(shù)從基因水平研究不同濃度NaAsO2和竹蓀多糖對 L-02肝細胞全基因表達譜的影響；
　　3.竹蓀多糖對砷致肝損傷干預(yù)作用：觀察IKBKG、DUSP6在砷中毒大鼠及竹蓀多糖干預(yù)后肝組織中的表達情況。為竹蓀多糖的生物利用和干預(yù)砷致肝損傷的

2、作用機制研究提供實驗依據(jù)。
　　方法：
　　1.采用水提醇沉法分別提取竹蓀子實體及菌托中的多糖，PMP衍生化后采用高效液相色譜法分析其單糖的組成和含量；分別用100mg/kg的竹蓀子實體多糖和竹蓀菌托多糖對大鼠灌胃，收集灌胃1h后的血清，三氯乙酸沉淀后測定此兩種多糖在大鼠的血清圖譜；
　　2.應(yīng)用Affymetrix PrimeView全人類基因表達譜芯片，篩選不同劑量 NaAsO2（50、100、150μmol/L）

3、組和竹蓀多糖（1.6、8、40mg/L）干預(yù)NaAsO2染毒L-02肝細胞后差異倍數(shù)大于等于5的差異表達基因。3.RT-PCR和免疫組化分析法分別檢測正常組、不同劑量 NaAsO2(25、50、100mg/kg)組及竹蓀多糖(25、50、100mg/kgl)干預(yù)NaAsO2染毒大鼠后肝臟中IKBKG和DUSP6基因 mRNA相對表達和蛋白表達情況。
　　結(jié)果：
　　1.高效液相色譜法檢測結(jié)果：竹蓀子實體和菌托多糖所含單糖分別

4、是：D-甘露糖、D-葡萄糖、D-半乳糖、D-木糖、L-巖藻糖，摩爾比分別是：1.53：52.30：2.78：1.00：1.78；D-甘露糖、核糖、L-鼠李糖、半乳糖醛酸、D-葡萄糖、D-半乳糖、D-木糖、L-巖藻糖，13.07：1.00：1.08：1.28：189.62：62.74：8.55：31.85；竹蓀子實體及菌托的血清樣品中可檢測到多糖代謝物且此兩種多糖體內(nèi)代謝物的出峰時間與單糖標準品一致。
　　2.基因芯片實驗結(jié)果：與對

5、照組比較，與染砷有關(guān)的共篩選出281個表達有差異的基因，表達上調(diào)者74個，表達下調(diào)者107個；隨著染砷劑量的增高而新增的表達差異基因有346個，其中上調(diào)的有113個，下調(diào)的有91個；與竹蓀多糖相關(guān)的差異基因有234個，其中上調(diào)基因有6個，下調(diào)基因有150個；與100μmol/LNaAsO2組相比，隨著竹蓀多糖劑量的增高而新增的干預(yù)砷中毒的表達差異基因有364個，其中上調(diào)107個，下調(diào)118個。
　　3.NaAsO2與竹蓀多糖對大鼠

6、肝組織中IKBKG、DUSP6mRNA表達水平的影響：與正常對照組相比，IKBKG mRNA相對表達量隨染砷劑量的增高有增高的趨勢，50mg/kg、100mg/kgNaAsO2組差異較明顯，差異有統(tǒng)計學意義;DUSP6 mRNA相對表達量則隨染砷劑量的增高而有增高的趨勢，各染砷組的差異有統(tǒng)計學意義；與100mg/kgNaAsO2組相比，不同濃度竹蓀多糖進行干預(yù)后，IKBKG mRNA相對表達量隨竹蓀多糖劑量的增高有降低的趨勢，其中50m

7、g/kgl、10mg/kg竹蓀多糖干預(yù)組的差異有統(tǒng)計學意義；DUSP6 mRNA相對表達量隨竹蓀多糖劑量的增加有降低的趨勢，其中25mg/kg、100mg/kgl竹蓀多糖干預(yù)組的差異有統(tǒng)計學意義；與中砷組比，竹蓀單獨作用組的IKBKG mRNA、DUSP6 mRNA相對表達量差異有統(tǒng)計學意義。
　　4.NaAsO2與竹蓀多糖對大鼠肝組織中IKBKG、DUSP6蛋白表達水平的影響：與正常對照組相比，IKBKG、DUSP6蛋白在不同濃

8、度NaAsO2組中均有表達，差異有統(tǒng)計學意義，且隨NaAsO2濃度的增高而增高；加竹蓀多糖干預(yù)后，與50mg/kgNaAsO2組相比，各竹蓀多糖組大鼠肝臟中IKBKG、DUSP6蛋白的表達有隨竹蓀多糖的增加有下降的趨勢。
　　結(jié)論：
　　1.竹蓀菌托所含竹蓀多糖的單糖種類和含量較竹蓀子實體多，竹蓀多糖經(jīng)胃腸道進入大鼠體內(nèi)后主要分解為單糖；
　　2.基因芯片結(jié)果提示竹蓀多糖對砷所致肝損傷的干預(yù)作用機制可能與抗炎作用、提高