Pomiferin對(duì)小鼠卵巢早衰的干預(yù)作用及機(jī)制研究.pdf

1、背景及目的：卵巢早衰(premature ovarian failure,POF)已成為嚴(yán)重危害女性健康的疾病之一,而且發(fā)病年齡越來越呈現(xiàn)年輕化,發(fā)病率越來越高。雖然隨著科學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展,在對(duì)卵巢早衰的診斷和治療等方面取得了一些的進(jìn)展,但因其病因及發(fā)病機(jī)理較復(fù)雜,早期確診艱難,并發(fā)癥廣泛,未找到理想的治療方法。因此,深入揭示卵巢早衰的病因及發(fā)病機(jī)制,尋找行之有效的干預(yù)卵巢早衰發(fā)生、發(fā)展的線索和物質(zhì),具有重要的理論和實(shí)用意義。
　

2、　 目前對(duì)于POF尚缺乏理想的干預(yù)防治手段?，F(xiàn)在醫(yī)學(xué)主要采用激素替代療法(HRT)、誘發(fā)排卵、免疫抑制治療、自身或異體卵巢移植技術(shù)、卵子贈(zèng)送及移植等方法。近年來,異黃酮類化合物已被證實(shí)有較好的治療卵巢早衰的效果。Pomiferin(橙基異黃酮)是從桑橙中提取出來的一種異黃酮類化合物,具有植物雌激素活性。它的分子式為C25H24O6,分子量為420。已有研究證實(shí)Pomiferin具有強(qiáng)抗氧化劑、弱雌激素、金屬螯合劑、抗菌劑、調(diào)控細(xì)胞周期

3、等作用。國(guó)內(nèi)外研究表明:Pomiferin具有植物雌激素作用,與內(nèi)源性雌激素作用相似,而且Pomiferin能與雌激素受體ERβ結(jié)合。與一般的雌激素相比,能夠減少乳腺增生,子宮肌瘤,血栓等不良反應(yīng)。從目前資料看,Pomiferin對(duì)卵巢早衰的治療作用研究還不明確,尤其是對(duì)干預(yù)卵巢早衰的機(jī)制研究尚比較缺乏。
　　 現(xiàn)代醫(yī)學(xué)普遍認(rèn)為POF病因復(fù)雜,確切病因尚不明確,可能由眾多因素引起,如遺傳學(xué)因素,免疫因素,放療和病毒感染等。而原始

4、卵泡儲(chǔ)備減少,凋亡加速,卵泡閉鎖、卵泡成熟過程存在障礙也是其中之一。近年來,關(guān)于POF發(fā)生的凋亡機(jī)制漸漸引起人廣大學(xué)者的關(guān)注。細(xì)胞凋亡是細(xì)胞衰老、死亡的主動(dòng)過程,此過程受基因調(diào)控并按一定的程序進(jìn)行。細(xì)胞凋亡為POF病因?qū)W提供了新的依據(jù)。在卵巢組織中,細(xì)胞凋亡調(diào)控了卵泡的繁殖和分化,可以說直接加速了卵泡閉鎖。Fas和Fas—L的的結(jié)合是成熟T細(xì)胞中活化、誘導(dǎo)凋亡的主要途徑。BCL-2是與Fas作用相反的分子,其能抑制Fas介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。

5、
　　 因此,基于以上分析推理,本實(shí)驗(yàn)擬探討Pomiferin對(duì)小鼠卵巢早衰的干預(yù)作用,并從細(xì)胞凋亡的角度深入探討Pomiferin對(duì)卵巢早衰的作用機(jī)理。
　　 方法：
　　 1.免疫性POF動(dòng)物模型,分組與給藥。小鼠SPF級(jí)BABL／c雌性小鼠作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。用小鼠透明帶ZP3第330—342個(gè)氨基酸序列作為免疫原建立POF小鼠模型。將小鼠隨機(jī)分為空白組,佐劑組,模型組,Pomiferin低劑量組(0.25g／K

6、g體重),Pomiferin中劑量組(0.5g／Kg體重),Pomiferin高劑量組(0.75g／Kg體重)。
　　 2.觀察每組小鼠的卵巢形態(tài)學(xué)和動(dòng)情周期的變化,用電子天平稱量每組小鼠用藥后的體重、卵巢重量、胸腺重量,比較重量指數(shù)。
　　 3.酶聯(lián)免疫法檢測(cè)小鼠外周血中FSH、E2水平。
　　 4.RT—PCR法測(cè)定卵巢組織Fas—L和Bcl-2 mRNA表達(dá)。
　　 5.免疫組化檢測(cè)卵巢組織Fas—

7、L和Bcl-2蛋白表達(dá)。
　　 6.Western-blot檢測(cè)卵巢組織Fas—L和Bcl-2蛋白表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 模型組:
　　 1.動(dòng)情周期:表現(xiàn)為動(dòng)情周期紊亂,動(dòng)情間期延長(zhǎng),陰道細(xì)胞涂片主要表現(xiàn)為大量白細(xì)胞及少量上皮細(xì)胞；
　　 2.卵巢形態(tài):在卵巢間質(zhì),見到成熟卵泡少,而淋巴細(xì)胞和漿細(xì)胞浸潤(rùn)浸較多；
　　 3.體重、卵巢重量、胸腺重量指數(shù)均下降;
　　 4.E2明

8、顯降低,FSH明顯升高;
　　 5.Fas—L明顯升高,Bcl-2明顯降低。
　　 Pomiferin干預(yù)組:
　　 1.動(dòng)情周期:動(dòng)情周期輕度紊亂,動(dòng)情間期稍長(zhǎng),主要為動(dòng)情前期,陰道細(xì)胞涂片主要表現(xiàn)為有核上皮細(xì)胞,也有少部分角化細(xì)胞；
　　 2.卵巢形態(tài):卵巢中的發(fā)育及成熟卵泡較多,而淋巴細(xì)胞和漿細(xì)胞浸潤(rùn)浸較少;
　　 3.卵巢重量、胸腺重量指數(shù)明顯升高,體重指數(shù)稍微增加。
　　 4.E

9、2顯著升高,FSH顯著降低。
　　 5.Fas—L明顯減低,Bcl-2明顯升高。
　　 結(jié)論：
　　 1.通過以上對(duì)模型組小鼠動(dòng)情周期、卵巢形態(tài)、卵巢重量指數(shù)、胸腺重量指數(shù)、E2、FSH等指標(biāo)的檢測(cè),證實(shí)模型構(gòu)建成功。
　　 2.Pomiferin對(duì)自身免疫性POF小鼠的免疫功能具有調(diào)節(jié)作用,能夠使胸腺重量指數(shù)上升；
　　 3.Pomiferin對(duì)自身免疫反應(yīng)所引起的卵巢早衰有改善作用,使卵巢重量