長(zhǎng)鏈非編碼RNA H19和HOTAIR在宮頸癌外周血中的表達(dá)及其臨床意義.pdf

1、研究背景:宮頸癌是婦科最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，隨著HPV病毒感染和宮頸細(xì)胞學(xué)這兩個(gè)宮頸癌篩查的應(yīng)用，增加了發(fā)現(xiàn)癌前病變并進(jìn)行早期治療的機(jī)會(huì)，并能夠顯著降低宮頸癌的發(fā)生率和死亡率。因此，宮頸癌早期診斷的檢測(cè)非常重要?，F(xiàn)已有不少研究證實(shí)在不同類型癌癥患者的血清或血漿中可以檢測(cè)到特異性的分子。其中部分研究表明使用循環(huán)生物標(biāo)志物有助于對(duì)宮頸癌高風(fēng)險(xiǎn)患者的早期識(shí)別，但現(xiàn)在對(duì)宮頸癌循環(huán)標(biāo)記物的認(rèn)識(shí)還處于初級(jí)階段。
　　長(zhǎng)鏈非編碼RNAs（lon

2、g non-coding RNAs，LncRNAs）現(xiàn)已成為研究熱點(diǎn)，其在腫瘤發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮著重要作用。LncRNAs是長(zhǎng)度超過(guò)200nt的一類RNA分子，由于其缺少開(kāi)放閱讀框架而不具有編碼蛋白質(zhì)潛能，所以最初被視作轉(zhuǎn)錄過(guò)程的“暗物質(zhì)”而未受到重視。但近來(lái)有大量研究表明，LncRNAs參與機(jī)體各種調(diào)節(jié)過(guò)程如生長(zhǎng)發(fā)育、細(xì)胞的增殖、分化和凋亡等，并與多種腫瘤、神經(jīng)障礙性疾病、感染性疾病以及心腦血管疾病等密切相關(guān)。閱讀相關(guān)文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)有不少研

3、究表明，一些LncRNAs可能在宮頸癌發(fā)病機(jī)理中起著重要作用例如H19、HOTAIR、SRA、LincRNA-p21、UCA1、MALAT-1、ANRIL、BCYRNI等。
　　已有研究表明從血漿中分離獲得的外泌體中除有大量的miRNA外，還有一些LncRNAs（約占3.36％），這為外周血中存在LncRNAs提供了直接依據(jù)。一些LncRNAs可在某些腫瘤或心血管疾病患者血清（血漿）中穩(wěn)定表達(dá)，并可作為循環(huán)診斷標(biāo)志物，如宮頸癌的L

4、ncRNA-PVT1、乳腺癌的LncRNA-H19，結(jié)腸癌的LncRNA-HOTAIR，肝癌的LncRNA-HEIH，心肌梗死的LncRNA-LIPCAR。
　　目的:探討長(zhǎng)鏈非編碼RNA H19和HOTAIR在宮頸癌外周血中的表達(dá)及其臨床意義。
　　研究方法:1、收集2016年1-10月，52例宮頸癌術(shù)前以及39例因婦科良性疾病入院宮頸癌篩查正?；颊咄庵苎?ml。其中10例宮頸癌患者行術(shù)前、術(shù)后對(duì)比。所選病例均經(jīng)病理診斷證

5、實(shí)，術(shù)前均未行任何治療。
　　2、對(duì)收集的血清標(biāo)本進(jìn)行Total RNA提取和純化。實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)LncRNAs的表達(dá)，并繪制擴(kuò)增曲線以及溶解曲線，記錄獲得的各樣本的CT值。
　　3、數(shù)據(jù)分析:
　　1) Excel表格分析目的基因的相對(duì)表達(dá)量。相對(duì)定量的計(jì)算公式為:foldinducation=2-△△Ct。fold inducation得出的結(jié)果是實(shí)驗(yàn)組目的基因的相對(duì)表達(dá)量。ΔΔCt=宮頸癌組（Ct目的基因

6、-Ct內(nèi)參基因）-對(duì)照組（Ct目的基因-Ct內(nèi)參基因）
　　2)應(yīng)用SPSS21.0軟件分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，用非參數(shù)檢驗(yàn)Mann-Whitney U分析宮頸癌患者和對(duì)照組血清樣本LncRNA H19、HOTAIR表達(dá)水平差異，宮頸癌術(shù)前、術(shù)后H19和HOTAIR表達(dá)水平對(duì)比，并和宮頸癌患者臨床病理資料進(jìn)行相關(guān)性分析，根據(jù)血清LncRNA H19和HOTAIR表達(dá)水平繪制受試者工作曲線(receiveroperating characte

7、ristic curve，ROC)。以P＜0.05（雙側(cè)）為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:1、血清樣本實(shí)驗(yàn)組共抽提獲得52個(gè)Total RNA樣本，對(duì)照組共抽提獲得39個(gè)Total RNA樣本。2、所有樣本進(jìn)行實(shí)時(shí)定量RT-PCR，應(yīng)用SPSS21.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析數(shù)據(jù)分析，結(jié)果顯示，血清LncRNA H19、HOTAIR在宮頸癌患者的表達(dá)水平顯著高于對(duì)照組(P＜0.01)，血清H19、HOTAIR術(shù)后較術(shù)前表達(dá)水平顯著降低(P＜0