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文檔簡介
1、胃癌是全球范圍內(nèi)致死率位居第二的惡性腫瘤,5年生存率不足25%。由于胃癌早期患者無明顯癥狀,且大部分病人都不主動(dòng)做胃鏡檢查,診斷時(shí)已步入中晚期。因此,尋找可靠的生物標(biāo)志物作為早期診斷依據(jù)成為胃癌研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)。長鏈非編碼RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是一類不編碼蛋白或只是編碼較短的多肽、長度大于200個(gè)核苷酸的RNA分子。lncRNA在表觀遺傳學(xué)水平上調(diào)控基因表達(dá),與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)在外
2、周血中有穩(wěn)定的循環(huán)lncRNA存在,表明血漿或血清lncRNA可能會成為一種非侵入性的腫瘤早期診斷、基因治療及預(yù)后評估的腫瘤新型標(biāo)志物。
缺氧誘導(dǎo)因子-1(hypoxia inducible fator-1,HIF-1)是一類在缺氧時(shí)位于人和哺乳動(dòng)物體內(nèi)最廣泛的內(nèi)源轉(zhuǎn)錄因子。反義缺氧誘導(dǎo)因子(antisense hypoxia inducible facter,aHIF)是HIF-1α的反義轉(zhuǎn)錄物,且能夠識別互補(bǔ)序列。研究發(fā)現(xiàn)
3、,aHIF在肝癌、腎癌、宮頸癌和乳腺癌等惡性腫瘤中發(fā)揮原癌基因的功能。
在細(xì)胞周期激酶抑制因子4(INK4)基因座中反義非編碼RNA(antisense non-coding RNA in the INK4 locus,ANRIL)定位于9q21染色體上,通過表觀遺傳調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長、增殖、衰老與凋亡。近年來研究發(fā)現(xiàn),ANRIL參與并調(diào)控多種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展,如肺癌、黑色素瘤、肝癌和白血病等。
目的:
探
4、討lncRNA aHIF和ANRIL在胃癌組織、胃粘膜上皮癌變細(xì)胞及胃癌患者血漿中的表達(dá)情況及其聯(lián)系,結(jié)合臨床病理參數(shù)分析并討論其臨床價(jià)值。
方法:
1、檢測組織中aHIF和ANRIL的表達(dá)
采集33例胃癌患者的胃癌組織及配對的癌旁組織,應(yīng)用qRT-PCR檢測lncRNA aHIF和ANRIL的表達(dá)水平。
2、建立細(xì)胞模型,檢測細(xì)胞中aHIF和ANRIL的表達(dá)
用與人類胃癌相關(guān)的化學(xué)致癌
5、劑N-甲基-N’-硝基-N-亞硝基胍(MNNG)誘導(dǎo)人胃粘膜上皮永生化細(xì)胞系GES-1癌變,得到惡性轉(zhuǎn)化后的MC細(xì)胞。光學(xué)顯微鏡下觀察比較GES-1、MC細(xì)胞的形態(tài)變化,用Western blot實(shí)驗(yàn)檢測E-鈣黏蛋白(E-cad)、波形蛋白(Vimentin)及磷酸化蛋白(P-STAT3)的表達(dá)水平,同時(shí)用熒光定量PCR檢測lncRNA aHIF和ANRIL在GES-1、MC細(xì)胞中的表達(dá)情況。
3、檢測外周血中aHIF和ANR
6、IL的表達(dá)
采集胃癌患者的血漿51例和性別、年齡與之對應(yīng)的健康者血漿51例,采用qRT-PCR檢測血漿中l(wèi)ncRNA aHIF和ANRIL的表達(dá)水平,比較分析aHIF、ANRIL在胃癌患者血漿中的表達(dá)與在胃癌組織中的相關(guān)性。統(tǒng)計(jì)并分析血漿中aHIF、ANRIL的表達(dá)與胃癌患者臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系。
結(jié)果:
1、qRT-PCR顯示lncRNA aHIF和ANRIL在胃癌組織中的表達(dá)水平明顯高于配對的癌旁組織
7、(P均<0.01)。
2、光學(xué)顯微鏡下顯示,正常胃粘膜上皮細(xì)胞GES-1形態(tài)呈梭形,排列有序,呈單層生長;經(jīng)化學(xué)誘導(dǎo)劑MNNG處理后的MC細(xì)胞形態(tài)發(fā)生顯著改變,細(xì)胞接觸緊密,細(xì)胞變大,伸出觸角,呈不規(guī)則形、多觸角形、長梭形及多核型。Western blot顯示MC細(xì)胞中胃癌相關(guān)蛋白E-cad低表達(dá)、Vimentin及P-STAT3均高表達(dá)。與GES-1細(xì)胞相比,lncRNA aHIF和ANRIL在MC細(xì)胞中表達(dá)明顯上調(diào)(aHI
8、F:P<0.01;ANRIL:P<0.05)。
3、胃癌患者血漿中l(wèi)ncRNA aHIF和ANRIL的表達(dá)水平較健康者明顯升高(P均<0.01),與胃癌組織中的表達(dá)水平呈正相關(guān)(aHIF:r=0.721,P<0.01;ANRIL:r=0.719,P<0.01)。lncRNA aHIF和ANRIL在胃癌患者外周血中的表達(dá)與患者的性別、年齡、腫瘤大小、TNM分期、浸潤深度以及分化程度之間無明顯相關(guān)性(P>0.05),而與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移
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