長鏈非編碼RNA UCA1在宮頸癌順鉑耐藥中的作用研究.pdf

1、第一部分長鏈非編碼RNA芯片篩選及篩選基因的表達(dá)驗證
　　目的：
　　應(yīng)用微陣列芯片技術(shù)檢測宮頸癌組織中長鏈非編碼 RNA的表達(dá)譜，通過觀察長鏈非編碼 RNA在宮頸癌及癌旁組織中的表達(dá)差異。
　　方法：
　　1.應(yīng)用微陣列芯片技術(shù)檢測宮頸癌與癌旁組織中長鏈非編碼 RNA的表達(dá)譜。2.通過 Real-time-PCR檢測篩選分子對表達(dá)譜芯片結(jié)果進(jìn)行驗證；3.根據(jù)表達(dá)差異，選擇相應(yīng)候選分子開展后續(xù)研究。
　　結(jié)

2、果：
　　1.長鏈非編碼 RNA表達(dá)譜芯片分析顯示，宮頸癌與癌旁組織相中長鏈非編碼 RNA表達(dá)譜存在顯著差異。結(jié)果顯示表達(dá)差異有4倍以上的長鏈非編碼 RNA有47條，其中上調(diào)的有26條，下調(diào)的有21條。（P<0.05）；2.通過 UCSC數(shù)據(jù)庫分析統(tǒng)計，Real-time-PCR檢測驗證篩選芯片結(jié)果中表達(dá)上調(diào)的8條Lnc RNA在宮頸癌及癌旁組織中表達(dá)水平，驗證結(jié)果分析與芯片結(jié)果相一致；3. Real-time-PCR檢測結(jié)果顯示

3、篩選驗證LncRNA中 UCA1在宮頸癌組織中明顯高表達(dá)，結(jié)合 UCA1與細(xì)胞凋亡關(guān)系密切，選取UCA1作為候選分子開展后續(xù)研究。
　　第二部分宮頸癌組織中Lnc RNA UCA1的表達(dá)差異及臨床意義
　　目的:
　　探討在宮頸癌組織中Lnc RNA UCA1的表達(dá)差異及臨床相關(guān)性；
　　方法：
　　1.利用PCR技術(shù)檢測LncRNA UCA1在宮頸癌各組織中的表達(dá)；2.結(jié)合臨床信息分析患者宮頸癌組織中 U

4、CA1表達(dá)差異與 FIGO分期，病理分型，腫瘤浸潤程度相關(guān)性。
　　結(jié)果：
　　1. qPCR檢測宮頸癌組織中l(wèi)ncRNA UCA1的相對表達(dá)量分別為：宮頸癌組:28.4±7.8；癌旁組：10.9±3.8；非瘤變組：4.2±2.3;宮頸 CIN組:12.2±16.9。UCA1的表達(dá)在宮頸癌組織中高于宮頸癌旁組及宮頸非瘤變組的表達(dá)（p<0.05）;2. UCA1的表達(dá)與腫瘤病理類型，F(xiàn)IGO分期，腫瘤浸潤深度顯著正相關(guān)（p<0

5、.01）。
　　第三部分探討長鏈非編碼RNA UCA1在宮頸癌順鉑化療耐受中的作用及相關(guān)的機(jī)制
　　目的:
　　探討長鏈非編碼 RNA UCA1對宮頸癌細(xì)胞順鉑耐藥的影響，初步分析其相關(guān)的分子機(jī)制。
　　方法：
　　1.通過被動增加順鉑劑量刺激建立順鉑耐受HeLa細(xì)胞株HeLa/DDP；2.利用Real-TimePCR檢測宮頸癌 HeLa細(xì)胞及順鉑耐藥 HeLa/DDP細(xì)胞中 LncRNA UCA1的表達(dá)水

6、平；3.通過構(gòu)建 pcDNA3.0-UCA1載體和 UCA1 siRNA，在宮頸癌 HeLa細(xì)胞中分別進(jìn)行 UCA1基因過表達(dá)及基因沉默，采用CCK-8、Edu法及流式細(xì)胞術(shù)分析 HeLa細(xì)胞的增殖活性；4.利用Western-blotting方法檢測 UCA1調(diào)節(jié)宮頸癌 HeLa細(xì)胞株中細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白 Caspase-3、p21、survivin及 CDK2表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　1.PCR結(jié)果顯示宮頸癌順鉑耐藥He

7、La/DDP細(xì)胞中 UCA1表達(dá)明顯上調(diào)；2. CCK-8、Edu法及流式細(xì)胞術(shù)的結(jié)果顯示 UCA1過表達(dá)在 HeLa細(xì)胞中顯著降低由順鉑引起的細(xì)胞凋亡；3. Western-blotting的結(jié)果顯示UCA1過表達(dá)能夠下調(diào)細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白Caspase-3及 p21的水平，同時上調(diào)細(xì)胞周期蛋白 survivin及 CDK2的水平。對 UCA1沉默后進(jìn)一步驗證了以上結(jié)果。
　　結(jié)論：
　　1.通過芯片篩查及 Realtime