長鏈非編碼RNA-ROR在腎癌中的表達及臨床意義的研究.pdf

1、腎癌是泌尿系統(tǒng)中最常見的腫瘤之一，發(fā)病率呈逐年上升趨勢，在成人惡性腫瘤患者中占據(jù)2％到3％。雖然已經(jīng)積極接受治療，但是對于腎癌患者而言，五年的生存期也只有大概55％，并且轉(zhuǎn)移性腎癌患者更是還不足10％。所以，對腎癌進行深入分析，研究發(fā)生和發(fā)展的重要分子機制，以及找尋一種可靠安全的生物標志物，對于腎癌患者的生活質(zhì)量以及生存率的提高具有重要意義。隨著經(jīng)濟社會的快速發(fā)展，測序技術(shù)也得到了飛速的提高，在腫瘤性疾病方面展開的研究更為深入，人們開始

2、普遍關(guān)注長鏈非編碼RNA，其屬于之前被認為無任何功能基因組轉(zhuǎn)錄環(huán)節(jié)的“噪音”。Lnc RNA就是核苷酸的數(shù)量超過了200個，并且無法翻譯成蛋白質(zhì)的RNA。它的序列原件非常保守，空間二級結(jié)構(gòu)較為特殊，并且還具有復雜的亞細胞定位，可以存在胞漿或者細胞核中。它一般是通過表觀遺傳學等方面來對基因進行調(diào)控，并且如果它表達異常，則和眾多疾病之間存在緊密的聯(lián)系。
　　長鏈非編碼RNA-ROR(Large intergenic non-codin

3、g RNA-regulator of reprogramming，LincRNA-ROR)即LncRNA-ROR作為一種最新發(fā)現(xiàn)的，能夠針對細胞重編程過程具有重要調(diào)控作用的長鏈非編碼RNA。現(xiàn)有的研究表明，ROR在誘導多能性干細胞(induced pluripotent stem cells，iPSCs)形成、DNA損傷、氧化應(yīng)激等過程中發(fā)揮重要的作用;此外，在腫瘤中，目前發(fā)現(xiàn)lncRNA-ROR與乳腺癌、肝癌的發(fā)生、轉(zhuǎn)移等密切相關(guān)。目

4、前還未見LncRNA-ROR在腎癌組織表達情況及其與腎癌病理特征關(guān)系的研究報道。本研究通過檢測腎癌組織中LncRNA-ROR的表達，分析腎癌組織中LncRNA-ROR的表達水平與腎癌臨床病理資料的相關(guān)性，為揭示腎癌發(fā)生機制及發(fā)現(xiàn)新型腎癌診斷分子標記物提供重要的線索。
　　本研究內(nèi)容分為兩個部分:
　　第一部分 長鏈非編碼RNA-ROR在腎癌組織中的表達及其與臨床病理和預后的關(guān)系
　　研究目的:
　　通過對LncR

5、NA-ROR在腎癌組織中的表達水平，同時分析LncRNA-ROR的表達水平與腎癌臨床病理資料的相關(guān)性。
　　研究內(nèi)容:
　　1.樣本收集
　　選取在遼寧醫(yī)學院附屬第一醫(yī)院泌尿外科就診的患者，經(jīng)病理確診的腎癌患者36例，在術(shù)中切除腫瘤組織標本和癌旁正常組織，并統(tǒng)計其臨床資料。
　　2.采用實時定量PCR方法檢測36例腎癌組織及癌旁正常組織中LncRNA-ROR的表達水平。
　　3.分析在腎癌組織標本中LncR

6、NA-ROR表達和其臨床特征及預后的關(guān)系。
　　研究結(jié)果:
　　腎癌組織中LncRNA-ROR表達水平(10.84±4.53)高于癌旁組織LncRNA-ROR表達水平(4.15±1.38)，差異有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)。LncRNA-ROR表達量與腎癌患者年齡和性別無關(guān)，和臨床分期與腫瘤大小有關(guān)。
　　研究結(jié)論:
　　LncRNA-ROR在腎癌組織中表達顯著升高，與LncRNA-ROR在癌旁組織中表達相比，差

7、異具有統(tǒng)計學意義;LncRNA-ROR表達量與腎癌患者年齡和性別無關(guān)，和臨床分期與腫瘤大小有關(guān)。LncRNA-ROR可作為判斷腎癌預后的一項潛在的腫瘤標志物。
　　第二部分 長鏈非編碼RNA-ROR在腎癌細胞系中的表達及其影響腫瘤增殖的可能機制
　　研究目的:
　　分析LncRNA-ROR在腎癌細胞系的表達水平，探討其影響腫瘤增殖的可能機制。
　　研究內(nèi)容:
　　1.采用實時定量PCR檢測LncRNA-RO

8、R在腎透明細胞癌細胞系Caki-1細胞、Caki-2細胞的表達情況。
　　2.構(gòu)建LncRNA-ROR shRNA質(zhì)粒，將其轉(zhuǎn)染至腎癌細胞系中，RT-PCR檢測LncRNA-ROR表達情況，下調(diào)LncRNA-RoR的表達后采用CCK8和凋亡試劑盒測定腎癌細胞的增殖和凋亡情況。
　　3.采用western blot分析測定腎癌細胞中LncRNA-ROR受抑制后P53和c-Myc的表達水平。
　　4.采用CCK8法檢測腎癌

9、細胞低表達lncRNA ROR、抑制p53和過表達c-Myc后細胞增殖情況。
　　研究結(jié)果:
　　1.LncRNA ROR在腎癌Caki-1細胞表達水平為(11.22±3.45)，在Caki-2細胞表達水平為(17.47±1.39)，LncRNA ROR在正常腎小管上皮HK細胞表達水平為(3.39±0.43)，LncRNAROR在腎癌細胞中表達量明顯高于HK細胞，差異具有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)。
　　2.成功構(gòu)建L

10、ncRNA-RoR shRNA質(zhì)粒，將其轉(zhuǎn)染至腎癌細胞株中，qRT-PCR技術(shù)檢測lncRNA-ROR表達情況:Caki-1細胞中ROR的表達量(0.89±0.12)顯著降低，和對照組(5.36±1.16)相比差異具有統(tǒng)計學意義(p＜0.05);Caki-2細胞中ROR的表達量(1.21±0.06)顯著降低，和對照組(12.48±1.51)相比差異具有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)。
　　3.沉默LncRNA ROR基因?qū)е履I癌細胞增

11、殖能力下降，與對照組相比差異有統(tǒng)計學意義(p＜0.05);沉默LncRNA ROR基因?qū)е履I癌細胞凋亡增加，與對照組相比差異有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)。
　　4.抑制LncRNA-ROR表達能夠誘導增加p53基因的表達，與對照組相比，差異有統(tǒng)計學意義(p＜0.05);抑制LncRNA-ROR表達能夠誘導減低c-Myc的表達，與對照組相比，差異有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)。
　　5.低表達lncRNA ROR同時抑制p53后

12、細胞增殖率高于單獨低表達lncRNAROR后細胞增殖率，差異均具有統(tǒng)計學意義(p＜0.05);低表達LncRNA ROR同時過表達c-Myc后細胞增殖率高于單獨低表達lncRNA ROR后細胞增殖率，差異均具有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)。
　　研究結(jié)論:
　　LncRNA-ROR在腎癌細胞中表達顯著升高;沉默LncRNA ROR基因?qū)е履I癌細胞增殖能力下降，凋亡增加，可能通過調(diào)整p53基因和c-Myc基因的表達調(diào)整細胞的增殖