長鏈非編碼RNA H19在IgA腎病中的表達(dá)及其臨床意義.pdf

1、我國慢性腎臟病的發(fā)病率高達(dá)10％~13%，部分患者隨著病情遷延會逐漸進(jìn)展到終末期腎病，這無疑成為我國嚴(yán)重的公共健康問題和沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。慢性腎臟病的主要病因包括各種原發(fā)和繼發(fā)的腎小球疾病，其中IgA腎病是發(fā)病率最高的原發(fā)性腎小球疾病，并且約有25%的IgA腎病患者在確診10～20年之后進(jìn)入終末期腎病。IgA腎病起病隱匿，部分患者在首次確診時(shí)已處于中晚期，或進(jìn)入腎功能失代償期；而只有少部分患者由于早發(fā)現(xiàn)、早診斷，得到及時(shí)治療獲得較長生存時(shí)

2、間和較好生存質(zhì)量。因此IgA腎病的早診斷和干預(yù)是決定治療效果和生存質(zhì)量的重要因素。但迄今為止，IgA腎病診斷完全依賴于腎活檢病理檢查，穿刺活檢術(shù)是一項(xiàng)有創(chuàng)操作，有大出血等并發(fā)癥風(fēng)險(xiǎn)，穿刺獲得的腎小球數(shù)量有限，不足以準(zhǔn)確評估腎臟的病變嚴(yán)重程度，同時(shí)臨床上也難以通過反復(fù)腎臟穿刺活檢來監(jiān)測疾病的進(jìn)展，對IgAN的治療效果也不盡人意。因此尋找能夠用于IgAN評估病情、判斷預(yù)后的無創(chuàng)標(biāo)志物以及新的干預(yù)靶點(diǎn)是目前慢性腎臟疾病研究領(lǐng)域中迫切需要解決的

3、問題。
　　由于近年來基分子生物學(xué)的迅猛發(fā)展，基因水平的標(biāo)志物獲得了越來越多的重視。LncRNA是一類長度大于200nt且自身不具備編蛋白能力的RNA，多數(shù)會形成更穩(wěn)定的二級結(jié)構(gòu)，在血清等體液中容易被檢測。更重要的是，研究表明lncRNA在不同的組織器官中表達(dá)差異，并且參與分化、增生、轉(zhuǎn)移等病理生理過程。上述特點(diǎn)展現(xiàn)了lncRNA作為疾病標(biāo)志物的可能性，而越來越多的研究也發(fā)現(xiàn)在前列腺癌、胃癌、膀胱癌的組織或者外周血中l(wèi)ncRNA都

4、具有疾病診斷和提示預(yù)后的能力，目前l(fā)ncRNA已經(jīng)成為各個(gè)研究領(lǐng)域?qū)ふ疑飿?biāo)志物的熱門方向。
　　LncRNA H19（H19）是一種具有高度保守性且主要在細(xì)胞質(zhì)表達(dá)的印記基因，其自身同時(shí)兼具促癌和抑癌作用，目前H19的研究主要集中在腫瘤疾病，其參與不同腫瘤缺氧應(yīng)激、增生、轉(zhuǎn)移、EMT等病理生理過程。然而，H19是否和慢性腎臟疾病相關(guān)？目前腎臟病學(xué)領(lǐng)域包括H19在內(nèi)的這些lncRNA分子的研究幾乎是一片空白。經(jīng)典的H19分子是否也

5、參與慢性腎臟疾病的發(fā)生進(jìn)展需要進(jìn)一步探討。
　　本課題通過前期篩選、qPCR檢測、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析等方法，期望尋找到一種能用于IgA腎病評估病情、指導(dǎo)預(yù)后的無創(chuàng)標(biāo)志物以及新的干預(yù)靶點(diǎn)，本研究主要包含以下三個(gè)部分：
　　第一部分：LncRNA H19在不同病理類型的腎小球疾病腎臟組織中的表達(dá)
　　方法：收集符合入組標(biāo)準(zhǔn)的腎組織標(biāo)本，提取標(biāo)本RNA，qPCR檢測H19表達(dá)。
　　結(jié)果：與對照組相比，不同腎小球疾病腎組織標(biāo)本

6、中H19表達(dá)呈降低趨勢，其中IgAN、LN和HSPN患者組織標(biāo)本中H19表達(dá)顯著下調(diào)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：H19在IgAN、LN和HSPN患者腎組織中的表達(dá)降低，可能與這些腎小球疾病的發(fā)生進(jìn)展有關(guān)，是否與腎臟纖維化相關(guān)還需要進(jìn)一步驗(yàn)證。
　　第二部分：LncRNA H19在IgAN患者腎組織中的表達(dá)及其臨床意義分析
　　方法：收集符合標(biāo)準(zhǔn)的入組患者病例及腎組織標(biāo)本，qPCR檢測H19表達(dá)，SPSS19.0進(jìn)行臨床

7、統(tǒng)計(jì)分析。
　　結(jié)果：IgAN患者（53例）腎組織中H19表達(dá)顯著低于對照組（27例）；腎組織H19獨(dú)立診斷IgAN的敏感性達(dá)85.2%，特異性達(dá)75.5%；組織H19的表達(dá)與IgAN Lee氏分級負(fù)相關(guān)（r=-0.5240）；Logistic回歸分析證實(shí)H19是IgAN腎臟纖維化的獨(dú)立性保護(hù)性因素；統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)H19表達(dá)與腎臟纖維化關(guān)系密切，而IgA沉積強(qiáng)度不影響組織中 H19的表達(dá)；腎組織 H19表達(dá)水平與 eGFR存在正相關(guān)

8、關(guān)系（r=0.6087）。
　　結(jié)論：H19在IgAN患者腎組織中的表達(dá)與Lee氏分級相關(guān)，而與IgA沉積強(qiáng)度無關(guān)，說明H19不是IgAN特異的診斷標(biāo)志物，而是IgAN慢性化程度的標(biāo)志物。腎組織H19和eGRF正相關(guān)，可能成為動態(tài)檢測IgAN病情進(jìn)展的標(biāo)志物。
　　第三部分：LncRNA H19在IgAN患者血清中的表達(dá)及其臨床意義分析
　　方法：收集符合標(biāo)準(zhǔn)的入組患者病例及血清標(biāo)本，qPCR檢測H19表達(dá)，SPSS1

9、9.0進(jìn)行臨床統(tǒng)計(jì)分析。
　　結(jié)果：gAN患者腎組織和血清（21對）中H19表達(dá)有較強(qiáng)的相關(guān)性（r=0.7901），與尿液中H19無明顯相關(guān)性（r=0.2290）；IgAN患者（80例）血清H19表達(dá)顯著低于對照組（50例）；血清H19和Lee氏分級負(fù)相關(guān)（r=-0.6039）；血清H19診斷IgAN慢性化敏感性為82.0%，特異性為70.0%，與血清其他標(biāo)志物相比，具有較高靈敏度；血清H19與eGFR正相關(guān)（r=0.6039)；

10、追蹤隨訪入組患者，經(jīng)Kaplan-Meier method計(jì)算，血清H19高表達(dá)組IgAN患者1年腎臟生存率為63.9%，中位生存時(shí)間為12±0.487個(gè)月，低表達(dá)組IgAN患者1年腎臟生存率為20.5%，中位生存時(shí)間為10±1.242個(gè)月。
　　結(jié)論：IgAN患者血清中H19和組織H19顯著相關(guān)，在血清中H19低表達(dá)與Lee氏分級呈負(fù)相關(guān)。在診斷方面，與傳統(tǒng)血清標(biāo)志物相比，血清H19具有較高的靈敏度。而且血清H19與eGFR正相