基于高通量技術的蒙醫(yī)未熟熱、成熟熱證期蛋白質組學標志物與變證機制的研究.pdf

1、目的：
　　1.采用高通量質譜檢測技術篩選蒙醫(yī)未熟熱證期和成熟熱證期差異表達蛋白，分析其在疾病轉變過程中的功能機制、作用，初步為蒙醫(yī)發(fā)熱分期、分型提供“生物學依據(jù)”。
　　2.基于蛋白質組學的蒙醫(yī)溫病未熟熱、成熟熱證期變證機制的探討和試述。
　　方法：
　　采集符合標準的腮腫病組、流行性感冒組和麻疹病組等三組疾病蒙醫(yī)未熟熱、成熟熱二證期靜脈血5ml，離心、去除血細胞、分離血漿；對血漿樣品進行56℃高溫滅活處理；采

2、用AKTA蛋白純化儀去除20余種高豐度蛋白；使用BCA定量試劑盒及10-20％SDS-PAGE梯度凝膠電泳進行定量和質量檢測；再對待測樣品進行蛋白TMT10標記后，注入C18色譜柱，采用高通量質譜檢測技術對其進行蛋白質組學檢測，測定二證期蛋白含量，篩選二證期差異表達蛋白，尋找辯證診斷指標和特異性標志物。
　　結果：
　　質譜檢測結果顯示，共檢測出1500種蛋白，檢測多肽次數(shù)為41632，檢測多肽種類數(shù)為7619，其中在二證期

3、有差異表達的共1323個，差異表達1.3倍以上共1077個，成熟熱和未熟熱證期與正常組比較共同上調和下調的共164個（其中上調95個，下調69個），其中三組疾病在二證期同時上調和下調且差異1.3倍以上的共有8個。分別為范可尼貧血組蛋白D2亞型X2（Fanconi anemia, complementation group D2）、核酸內切酶結構域蛋白1前體（endonuclease domain containing1）、細胞周期蛋白依

4、賴性激酶5激活因子2（cyclin-dependent kinase5 regulatory subunit2）、DnaJ-Hsp40同源物亞家族C成員4（DnaJ homolog,subfamily C member4）、泛素羧基末端水解酶24亞型X1（PREDICTED:ubiquitin carboxyl-terminal hydrolase24 isoform X1）、布雷菲德菌素A抑制性鳥嘌呤核苷酸交換因子3亞型X1（PRED

5、ICTED:brefeldin A-inhibited guanine nucleotide-exchange protein3isoform X1）、NMDA2D離子型谷氨酸受體前體（glutamate receptor ionotropic,NMDA2D precursor）、配體依賴性輔助依賴因子亞型X1(PREDICTED:ligand-dependent corepressor isoformX1)等。其中上調6個，下調2個。