乙肝纖維化分期相關血漿標志物的定量蛋白質(zhì)組研究.pdf

1、肝纖維化發(fā)生的病因很多，我國多由HBV病毒感染導致，而在歐美等國則以酒精所致者多見。據(jù)世界衛(wèi)生組織報道，全球約20億人曾感染過HBV，其中3.5億人為慢性HBV感染者，每年大約有100萬人死于HBV感染導致的肝衰竭、肝硬化以及肝癌。我國是病毒性肝炎高發(fā)區(qū)，僅乙型肝炎病毒(HBV)攜帶者就達1.2億，其中慢性乙型肝炎患者有3,000萬以上，約25％慢性乙肝患者最終將發(fā)展為肝硬化(Liver/hopatic cirrhosis，LC)，甚至

2、肝癌(1)。假如肝纖維化病人得不到及時有效地治療，就有可能逐漸轉變?yōu)楦斡不?，甚至進一步發(fā)展為肝癌，每年肝硬化患者中肝癌的發(fā)生率大約為3％~1096。肝纖維化既是一種代償修復反應，又是肝損傷的促進因素，表現(xiàn)為肝內(nèi)結締組織過度增生與沉積。肝纖維化是一個慢性漸進的過程，準確診斷肝纖維化進程，可為病情診斷和臨床治療提供幫助。目前，肝穿刺活檢病理檢查是診斷慢性肝病肝纖維化、肝硬化的金標準，但其具有創(chuàng)傷性，患者易產(chǎn)生不適感及潛在并發(fā)癥；病人不愿意接

3、受多次肝穿跟蹤監(jiān)控病情及療效等，所以常規(guī)肝穿刺活檢在實際操作中具有相當難度。理想的診斷指標應具有高度敏感度和特異度，且簡便易行，患者易于接受，故尋求無創(chuàng)性診斷肝纖維化的有效方法目前是臨床醫(yī)生關注的熱點問題之一。 由于人體血漿(血清)包含了幾乎涉及人體所有器官或者組織相關的豐富信息，并能反映幾乎所有疾病狀態(tài)信息，再加上它具有取材方便快捷低創(chuàng)等特點，是最為理想的臨床治療和診斷的樣本材料。截至目前，在血漿中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了與肝纖維化以及硬化

4、相關的一些蛋白標志物，但由于它們在靈敏性和特異性等方面，還不能滿足臨床的需要，仍需借助肝穿進行病理檢查。因此，還需要進一步發(fā)掘具有臨床診斷或者治療意義的血漿蛋白標志物。近年來，隨著定量蛋白質(zhì)組學技術的發(fā)展，整體系統(tǒng)地從蛋白質(zhì)組水平分析血漿中與疾病及生理相關的蛋白標志物成為現(xiàn)實。 本實驗以目前的肝纖維化分期檢測“黃金標準”一肝穿病理檢測結果為標準，利用定量蛋白質(zhì)組技術手段，從血漿中挖掘與病理檢測結果相一致的蛋白(群)，以期發(fā)現(xiàn)與肝

5、纖維化分期相關的新蛋白(蛋白組合)，提高肝纖維化分期檢測的精確性和靈敏度，服務于纖維化發(fā)生機制研究和臨床實踐。 乙酰化定量標記技術是針對肽段N末端進行氘(氫)標記的定量蛋白質(zhì)組技術手段，具有標記完全、定量準確、操作簡單、價格便宜等特點。本研究利用此技術，針對基于病理檢查的乙肝纖維化一期(S1)、二期(S2)、三期(S3)、四期(S4)以及健康對照(S0)五組血漿樣本(各組包含10例左右樣本)進行差異對比分析，最終共得到了有定量信

6、息的血漿蛋白1，063個，其中在肝臟纖維化不同時期具有顯著差異(Ratio>1.5，P<0.05)的血漿蛋白246個，形成了與肝纖維化分級相關的候選蛋白(群)。針對差異蛋白定量Ratio值(組內(nèi)蛋白與內(nèi)標比值)進行聚類分析的結果顯示，總體差異蛋白(群)被聚為五大類別，在五組樣本(S0-S4)間分別呈現(xiàn)逐漸上升、逐漸下降、先上升后下降、先下降后上升以及上升下降波動等趨勢。五組間的聚類結果顯示，無纖維化以及纖維化前期(S0，S1，S2)被聚

7、為一類，纖維化后期(S3，S4)被聚為一類，提示差異蛋白Ratio值在纖維化前后和后期呈現(xiàn)明顯區(qū)別。其聚類分布特點與纖維化發(fā)展進程與實際病理特點相吻合。利用基于文獻數(shù)據(jù)支持的Ingenituy通路分析軟件對246個差異蛋白進行分析，結果表明，這些鑒定的差異蛋白大部分被定位在了八個主要的信號通路網(wǎng)絡(血管系統(tǒng)發(fā)育網(wǎng)絡圖/脂類代謝網(wǎng)絡圖/細胞生長分化通路網(wǎng)絡/免疫及淋巴系統(tǒng)調(diào)控網(wǎng)絡/細胞信號傳導與組織發(fā)育網(wǎng)絡/氨基酸代謝與蛋白修飾網(wǎng)絡/轉錄