艾滋病熱毒蘊(yùn)結(jié)證蛋白組學(xué)標(biāo)志物驗(yàn)證研究.pdf

1、目的：基于iTRAQ技術(shù)的艾滋病熱毒蘊(yùn)結(jié)證患者與健康人之間蛋白質(zhì)差異表達(dá)的蛋白組學(xué)研究基礎(chǔ)上，通過Western Blot技術(shù)對(duì)顯著性差異蛋白進(jìn)一步臨床驗(yàn)證及中藥干預(yù)研究，觀察特征性蛋白在表達(dá)變化情況，探索藥物療效與證候特征性蛋白表達(dá)變化之間規(guī)律，為艾滋病熱毒蘊(yùn)結(jié)證具有診斷及療效評(píng)價(jià)意義的蛋白分子標(biāo)志物研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，指導(dǎo)臨床中醫(yī)艾滋病證候診斷和療效評(píng)價(jià)。
　　方法：本研究應(yīng)用艾復(fù)康膠囊聯(lián)合高效抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療（HAART）干預(yù)

2、艾滋病期熱毒蘊(yùn)結(jié)證患者，療程為48周。分別于0周、48周采集全血及提取后血清樣本，檢測(cè)血細(xì)胞、病載、CD4+T、肝腎功等臨床基線指標(biāo)。基于前期iTRAQ技術(shù)研究基礎(chǔ)上，采用蛋白質(zhì)印跡法（Western Blot）技術(shù)分別對(duì)采集的AIDS熱毒蘊(yùn)結(jié)證患者和健康對(duì)照組、熱毒蘊(yùn)結(jié)證患者用藥前后血清標(biāo)本進(jìn)行差異蛋白檢測(cè)，運(yùn)用image J軟件分析灰度值，將每泳道所得出目的蛋白的灰度值與相應(yīng)的白蛋白灰度值做比較，得出相對(duì)灰度值，然后將每種抗體中的正

3、常組的相對(duì)灰度值和病人組的相對(duì)灰度值導(dǎo)入到GraphPad Prism5軟件，得出mean+/-SD的圖表。采用SPSS20．0統(tǒng)計(jì)軟件統(tǒng)計(jì)相關(guān)臨床資料。
　　結(jié)果：1、艾滋病期熱毒蘊(yùn)結(jié)證組與正常對(duì)照組比較，C5在艾滋病期熱毒蘊(yùn)結(jié)證表達(dá)下調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．05)，與iTRAQ篩選結(jié)果一致；keratin10在艾滋病期熱毒蘊(yùn)結(jié)證表達(dá)下調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．05)，與iTRAQ篩選結(jié)果一致。
　　2、艾滋病期

4、熱毒蘊(yùn)結(jié)證患者藥物干預(yù)后48周后與治療前比較，CD4+T、CD8+T趨于穩(wěn)定升高，CD4+T具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05)，CD8+T無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　3、艾滋病期熱毒蘊(yùn)結(jié)證用藥前后比較，C5在艾滋病期熱毒蘊(yùn)結(jié)證用藥后表達(dá)上調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．05)。
　　結(jié)論：1、本研究得出艾滋病艾滋病期熱毒蘊(yùn)結(jié)證特征性蛋白質(zhì)分別為C5、keratin10，這兩者有助于為艾滋病期熱毒蘊(yùn)結(jié)證中醫(yī)候診斷提供客觀化依據(jù)。上述蛋白功能