小鼠腦梗死后腦組織Pannexin1與HDAC9的表達改變及其意義.pdf

1、背景:
　　根據(jù)全球流行病學的調查，腦卒中(Cerebral Stroke)是導致人類死亡的第二大病因，其中缺血性腦卒中是腦血管病中最常見的一種類型，由于其高致殘率與高死亡率等原因，腦卒中仍然對人類生命健康構成重大的威脅。現(xiàn)今缺血性腦卒中的治療手段十分有限，至今仍缺乏有效的臨床治療藥物。深入研究缺血性腦卒中的發(fā)病機制以及尋找其潛在的治療靶點是現(xiàn)在研究的熱點。
　　Pannexin1廣泛分布于哺乳動物的中樞神經系統(tǒng)中，主要位于

2、細胞膜上，形成膜通道結構。已有研究發(fā)現(xiàn)基于Pannexin1的腦梗死治療策略在部分動物實驗中得到驗證，但對于Pannexin1蛋白在腦梗死中的表達情況尚未有較深入研究。因此本課題通過小鼠腦缺血模型探討Pannexin1表達的改變，希望為后續(xù)Pannexin1在腦梗死的作用與機制的研究提供新的理論依據(jù)。
　　最近研究發(fā)現(xiàn)，表觀遺傳學機制組蛋白去乙酰化等在缺血性腦梗死的病理機制中也起到重要的作用。在動物腦梗死模型上多種組蛋白去乙?；?/p>

3、抑制劑(HDACs Inhibitors)也被證實具有神經保護作用，HDACs家族具有多個亞型，部分亞型的作用與機制已被探討，其中組蛋白去乙?；?(HDAC9)在腦梗死中的作用尚未深入研究。因此，本課題通過觀察HDAC9在腦梗死后表達的情況，探索其與腦梗死發(fā)生的關系，從而進一步了解HDAC9在缺血性腦卒中的相關機制。
　　第一部分 小鼠腦梗死后腦組織Pannexin1的表達改變及其意義
　　目的:
　　檢測線栓法大腦

4、中動脈阻塞(MCAO)后小鼠不同部位腦組織Pannexin1在卒中后不同時間點的表達情況，探討Pannexin1與缺血性腦卒中的關系。
　　方法:
　　健康雄性C57BL/6小鼠隨機分為兩組:假手術組與模型組，模型組按照Koizumi's線栓法進行小鼠腦梗死模型的構建，假手術組只進行頸部正中縱行剖開后縫合。模型組根據(jù)術后不同時間(4h，8h，12h，1d，3d，7d and14d)提取健側與患側腦組織。采用免疫熒光染色觀察P

5、annexin1腦組織內分布位置，以及腦梗死后Pannexin1分別與MAP2和GFAP的關系，采用Western免疫印跡法與實時熒光定量PCR法檢測各組不同部位（梗死側/對側皮層//假手術組皮層）Pannexin1的表達變化。
　　結果:
　　1.免疫熒光染色:梗死灶周圍腦組織Pannexin1的熒光強度較其他部位明顯增強。
　　2.免疫熒光雙標染色:Pannexin1與MAP2存在共定位，與GFAP不存在共定位表達

6、。
　　3.蛋白與mRNA表達檢測:(1)小鼠梗死側腦組織Pannexin1的表達比健側大腦及對照組高，并具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，mRNA與蛋白表達的情況相似。(2)腦梗死后4小時，Pannexin1的表達已出現(xiàn)上調，到梗死后3天達到高峰，而后逐步下降，到14天Pannexin1的表達仍高于對照組。(3)進一步檢測Pannexin蛋白家族另一亞型Pannexin2表達情況:腦梗死后Pannexin2蛋白并沒有發(fā)生上調或下調

7、。
　　結論:
　　1.腦梗死后P annexin1表達的上調及隨時間表達改變的情況，進一步說明Pannexin1與缺血性卒中密切相關。
　　2.小鼠腦梗死后Pannexin1主要在神經元內表達，而非星形膠質細胞上。
　　3.Pannexin2蛋白可能不與Pannexin1協(xié)同參與腦梗死的病理過程。
　　第二部分 小鼠腦梗死后腦組織HDAC9的表達改變及其意義
　　目的:
　　檢測線栓法大腦中動

8、脈阻塞(MCAO)后小鼠不同部位腦組織HDCA9的表達及胞內分布變化，探討HDAC9與缺血性腦卒中的關系。
　　方法:
　　健康雄性C57BL/6小鼠隨機分為兩組:假手術組與模型組，模型組按照Koizumi's線栓法進行小鼠腦梗死模型的構建，假手術組只進行頸部正中縱行剖開后縫合。采用免疫熒光染色觀察HDAC9腦組織內分布位置與胞內分布變化，采用Western免疫印跡法與實時熒光定量PCR法檢測各組不同部位（梗死側/對側皮層/

9、MCAO組小腦/假手術組皮層/假手術組小腦）HDAC9的表達變化。
　　結果:
　　1.免疫熒光染色:(1)腦梗死后，梗死灶周圍腦組織HDAC9的熒光強度較其他部位明顯增強。(2)高倍鏡下與假手術組對比，梗死灶周圍HDAC9胞漿內表達增多，核內表達減少。
　　2.蛋白與mRNA表達檢測:與各組對比，梗死側腦組織HDAC9表達顯著升高，具有統(tǒng)計學差異（均P＜0.05），蛋白與mRNA表達情況相一致。
　　結論: