腦梗死后TDCS對pannexin1通道及神經(jīng)可塑性的作用.pdf

1、研究背景和目的:
　　 每年全世界約有2200萬的新發(fā)腦卒中患者，2012年最新發(fā)表的國際卒中試驗(yàn)3(The third international stroke trial，IST-3)研究表明，全球范圍內(nèi)在60歲以上人群中腦卒中為第二大死亡原因，而在15-59歲人群死亡原因中居第五位。中國人群最主要的類型是缺血性腦卒中，約占43％～73％。逐年增長的發(fā)病率與其高致死率及高致殘率使腦卒中成為中國亟待解決的公眾健康難題，促進(jìn)神經(jīng)

2、功能恢復(fù)是腦梗死治療的基本途徑。神經(jīng)功能恢復(fù)的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)在于兩方面:一是腦梗死后早期神經(jīng)結(jié)構(gòu)最大限度的保留;二是腦梗死恢復(fù)期神經(jīng)可塑性的調(diào)節(jié)。神經(jīng)可塑性在腦梗死后的相當(dāng)長時間內(nèi)都可受到調(diào)節(jié)，后者是我們治療的主要方向。作為局部腦缺血的一種反應(yīng)，在急性期過后的一段時間里，腦組織的自身修復(fù)過程被激活，然而這些內(nèi)源性中樞神經(jīng)系統(tǒng)重塑不足以使神經(jīng)功能恢復(fù)。如何刺激、放大其內(nèi)源性修復(fù)機(jī)制是我們面臨的重要問題，這個問題在近年來越來越受到重視。
　

3、　 目前認(rèn)為神經(jīng)可塑性在細(xì)胞結(jié)構(gòu)水平表現(xiàn)為:樹突分支、軸突出芽、樹突棘密度、突觸數(shù)目以及受體密度的改變。腦梗死灶同側(cè)及對側(cè)的軸突重塑、樹突棘密度調(diào)節(jié)是腦梗死后神經(jīng)結(jié)構(gòu)修復(fù)以及自發(fā)神經(jīng)功能恢復(fù)的關(guān)鍵因素。一般來說，缺血性腦卒中后誘發(fā)錐體神經(jīng)元軸突發(fā)生Waller變性，其程度取決于缺血病灶的嚴(yán)重程度，進(jìn)而軸突纖維沿著梗死灶邊緣發(fā)生再生重塑，存活的遠(yuǎn)端錐體束軸突出芽，其實(shí)在病灶同側(cè)和對側(cè)均可見軸突末梢出芽的增強(qiáng)。不僅如此，跨胼胝體的聯(lián)合纖維

4、也發(fā)生了重塑以及軸突出芽。近期研究的數(shù)據(jù)表明:腦梗死灶周圍樹突棘密度的變化與神經(jīng)功能的恢復(fù)密切相關(guān)。
　　 絕大多數(shù)樹突表面分布有樹突棘，每個樹突棘至少含有一個興奮性突觸，因而樹突棘對于腦神經(jīng)元細(xì)胞之間的信號傳遞具有重要作用。樹突棘在生長發(fā)育過程中有三種結(jié)局:絕大多數(shù)參與突觸后成分的構(gòu)成，一部分被修剪或沉默，另有小部分樹突棘進(jìn)一步增長發(fā)育成3級或4級樹突。樹突棘的結(jié)構(gòu)具有異質(zhì)性，表現(xiàn)為不同類型，如最常見的呈蘑菇狀，以及蚓狀和短粗

5、狀。對于成年大腦，大多數(shù)樹突棘是處于一個穩(wěn)定狀態(tài)，但新近證據(jù)表明，在某些情況下樹突棘的結(jié)構(gòu)可以發(fā)生顯著改變，突觸信號傳導(dǎo)的重塑可能因此而激活，樹突棘更新率可以在以下條件下得到增強(qiáng):外界感覺刺激、控制神經(jīng)興奮性包括長時程增強(qiáng)或長時程抑制、以及在某些神經(jīng)疾病病理?xiàng)l件下。進(jìn)一步的研究表明興奮性受體介導(dǎo)的電流強(qiáng)度、興奮性突觸后電位傳導(dǎo)、樹突棘頭端至母體樹突的細(xì)胞內(nèi)鈣離子彌散動力學(xué)改變等，均與樹突棘形態(tài)學(xué)改變有關(guān)。因而樹突棘可塑性是中樞神經(jīng)系統(tǒng)突

6、觸功能可塑性的一個重要方面。由于樹突棘具有受環(huán)境影響而表現(xiàn)出較強(qiáng)可塑性的特點(diǎn)，提示樹突棘對于腦可塑性的調(diào)節(jié)起到關(guān)鍵作用，那么在腦缺血病理情況下又起到哪些作用？
　　 腦缺血引起興奮性氨基酸毒性作用、鈣離子超載、自由基損傷、NO毒性作用、凋亡激活以及炎癥反應(yīng)等一系列病理生理變化，神經(jīng)元樹突繼之出現(xiàn)變性，其突出的形態(tài)學(xué)改變特點(diǎn)是沿著樹突莖出現(xiàn)曲張樣膨大，最初表現(xiàn)輕微，但隨著缺血狀態(tài)加重而逐漸加劇，最后常常表現(xiàn)為串珠樣。離體研究和在體

7、研究均可觀察到樹突的這種病理改變與缺血程度和病灶體積大小有關(guān)。正常情況下皮質(zhì)樹突與毛細(xì)血管的間距平均為13μm，而缺血后最初幾個小時在血管周圍80μm仍可存在完整樹突。有研究認(rèn)為體外培養(yǎng)皮質(zhì)神經(jīng)元經(jīng)氧-糖剝奪或給與谷氨酸受體激動劑，將導(dǎo)致嚴(yán)重的樹突膨脹和形態(tài)學(xué)改變，但在缺血缺氧不超過2小時就能在結(jié)構(gòu)上完全康復(fù)。在光化學(xué)法誘導(dǎo)的腦梗死模型上同樣可以觀察到受累樹突的康復(fù)，同時觀察到大多數(shù)再生的樹突棘重新分布定位于梗死灶周圍它們破壞、消失的位

8、點(diǎn)，這可能是因?yàn)橥挥|前成分在腦卒中早期處于相對較穩(wěn)定的狀態(tài)。有研究證明在海馬腦片上這些再生的樹突棘能誘發(fā)出來突觸反應(yīng)，這證明再生的樹突棘是具有生理功能的。有研究表明腦卒中誘發(fā)激活樹突分支增多、樹突棘密度增加，這提示樹突和樹突棘的重塑是腦可塑性的基礎(chǔ)。
　　 根據(jù)大腦中動脈梗死后損傷情況，梗死的腦組織分為三個區(qū)域:永久缺血壞死區(qū)域，臨近的再灌注損傷、膠質(zhì)瘢痕及細(xì)胞凋亡區(qū)域，外周的正常區(qū)域，缺血性腦梗死引發(fā)的神經(jīng)修復(fù)再生過程主要發(fā)生

9、在后兩個區(qū)域。梗死灶周圍區(qū)域(peri-infarct region)處于梗死灶壞死核心的周圍，處于腦組織的低灌注區(qū)域，但目前就peri-infarct region的形成機(jī)制以及范圍大小仍有爭議。有研究將其界定為梗死灶壞死核心的周圍存活的組織區(qū)域，對于嚙齒類動物而言可能不到1mm，實(shí)際上此區(qū)域界定的模糊與再灌注時間、代謝以及細(xì)胞凋亡有關(guān)，與臨床“半暗帶”概念有相似之處。眾多研究表明該區(qū)域是神經(jīng)再生發(fā)生的主要區(qū)域，因?yàn)橛泻芏嗌窠?jīng)生長促進(jìn)

10、和抑制因子表達(dá)在此發(fā)生重要的變化。另有電生理、影像學(xué)研究認(rèn)為該區(qū)域在受到外界環(huán)境影響下更具有活性，肢體功能的早期康復(fù)與梗死周圍區(qū)域皮質(zhì)功能重組有關(guān)。實(shí)際上腦組織的缺血性損害主要發(fā)生于梗死后的24小時內(nèi)，在熒光標(biāo)記的轉(zhuǎn)基因動物中觀察到缺血后樹突完整性破壞穩(wěn)定于梗死后的6小時之內(nèi)，進(jìn)一步離體研究表明受累樹突分支的數(shù)十微米內(nèi)結(jié)構(gòu)處于一個損害-修復(fù)的動態(tài)平衡，并且具有較為清楚的界限，然而在此界限邊緣看似未損傷的樹突其實(shí)在樹突棘水平發(fā)生著細(xì)微的變

11、化，主要表現(xiàn)為數(shù)目的進(jìn)行性減少或是密度的下降。有體外研究認(rèn)為缺血后樹突棘可有增長，提示增長的樹突棘可以限制破壞性離子電信號從頭端傳向樹突。越來越多研究表明在腦梗死后的數(shù)天至數(shù)周內(nèi)，腦梗死周圍區(qū)域是神經(jīng)可塑性的熱點(diǎn)區(qū)域，對神經(jīng)功能康復(fù)具有重要意義。
　　 經(jīng)顱直流電刺激(Transcranial direct current stimulation，TDCS)是近年來日益受到國內(nèi)外學(xué)者的重視的康復(fù)技術(shù)，TDCS作為無創(chuàng)性腦刺激技術(shù)

12、之一具有其獨(dú)特的優(yōu)勢，可以和物理治療同步進(jìn)行，而且安全性高。不少臨床研究觀察到TDCS對于肢體運(yùn)動功能提高、記憶改善、鎮(zhèn)痛等方面具有肯定的療效，不僅如此，對于語言、吞咽的恢復(fù)也有幫助。但其作用機(jī)理目前尚不清楚，且未見系統(tǒng)的研究報(bào)道。TDCS可以通過電極定向、定位調(diào)節(jié)相應(yīng)區(qū)域的神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)興奮性來促進(jìn)神經(jīng)功能恢復(fù)，是用來研究大腦活動性、促進(jìn)神經(jīng)可塑性的理想方法，而且近年來的研究表明TDCS能夠通過調(diào)節(jié)大腦活動影響神經(jīng)可塑性，比rTMS具有更少

13、的副作用。如前所述，腦卒中誘發(fā)激活樹突分支增多、樹突棘密度增加，樹突和樹突棘的重塑是腦可塑性的基礎(chǔ)，且腦梗死病理生理過程本身就可以誘導(dǎo)病灶周圍的神經(jīng)再生，特別是腦梗死周圍區(qū)域1-12周神經(jīng)興奮性的增加對于肢體功能恢復(fù)至關(guān)重要。
　　 目前認(rèn)為TDCS可以將足夠的電流引入大腦皮質(zhì)，特點(diǎn)是不誘發(fā)動作電位，而只調(diào)節(jié)神經(jīng)元的膜靜息電位，從而僅調(diào)節(jié)已經(jīng)處于活動狀態(tài)的神經(jīng)元興奮性。TDCS既能夠增強(qiáng)神經(jīng)元的活動，也能抑制它們的活動，這要看電

14、流的方向和神經(jīng)元的排列方式。大腦皮層神經(jīng)元樹突指向頭皮方向，當(dāng)帶正電荷的經(jīng)顱直流電刺激電極（正極）靠近樹突時，電流就導(dǎo)致處于活動狀態(tài)的神經(jīng)元興奮性增加，而負(fù)極的作用正好相反。有臨床研究觀察到興奮性氨基酸受體NMDAR阻滯劑右美沙芬可以阻斷TDCS作用于神經(jīng)細(xì)胞的正極、負(fù)極效應(yīng)，從而推測NMDA受體參與TDCS改變神經(jīng)可塑性。另有研究觀察到卡馬西平選擇性消除了TDCS的正極效應(yīng)而未影響負(fù)極效應(yīng)，推測TDCS正極效應(yīng)需要離子通道的參與，膜電

15、位去極化及細(xì)胞間相互作用可能是其主要機(jī)制之一。雖然TDCS作用于神經(jīng)可塑性的機(jī)制目前仍不明確，需要進(jìn)一步的動物實(shí)驗(yàn)研究去探討，但上述研究為我們提供了研究切入點(diǎn):神經(jīng)細(xì)胞聯(lián)系通道——縫隙連接通道。
　　 目前縫隙連接通道在腦缺血中的作用日益受到關(guān)注。pannexins家族是近年來確定的組成通道的蛋白家族。目前研究認(rèn)為缺血誘導(dǎo)pannexin1通道的開放，繼而膜通透性增加，同時出現(xiàn)陽離子電流的調(diào)節(jié)異常，此過程雖也有ASICla通道、

16、電壓依賴Na+通道、NMDA受體以及TRP通道的參與，但通道的電流震蕩是關(guān)鍵的環(huán)節(jié)。Pannexin1通道開放導(dǎo)致的電流震蕩使神經(jīng)元持續(xù)處在膜靜息電位水平(-60mV)，這提示通道電流是導(dǎo)致缺氧去極化的主要成因，同時pannexin1通道的開放導(dǎo)致葡萄糖和ATP的外滲，以上從細(xì)胞水平說明pannexin1通道開放是導(dǎo)致缺血后神經(jīng)電興奮性改變、神經(jīng)細(xì)胞間通信的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。有意思的是Pannexin1被發(fā)現(xiàn)和PSD-95（postsynapt

17、ic density protein95）共同存在于突觸后膜，參與影響突觸可塑性。可以預(yù)見到腦梗死后雙側(cè)大腦半球的神經(jīng)興奮性以及pannexin1通道誘導(dǎo)的電流震蕩是不平衡的，早期應(yīng)用TDCS干預(yù)這種不平衡對于神經(jīng)功能的康復(fù)有著重要意義。
　　 研究目的:
　　 腦梗死后TDCS干預(yù)有助于神經(jīng)功能恢復(fù)，那TDCS對皮層神經(jīng)元pannexin1通道、神經(jīng)可塑性有何影響？我們預(yù)期通過本課題明確pannexin1通道在腦梗死后

18、的改變以及TDCS對其的影響，并初步探討TDCS的干預(yù)時機(jī)及其作用于神經(jīng)功能重組的機(jī)制，為腦梗死后治療提供新的靶點(diǎn)，并為TDCS的應(yīng)用提供理論依據(jù)。本課題采用大腦中動脈閉塞模型(MCAO)，對peri-infarct region進(jìn)行如下觀察研究:
　　 1.觀察成年大鼠腦梗死后TDCS對腦梗死灶周圍區(qū)樹突棘形態(tài)學(xué)的影響;
　　 2.觀察成年大鼠腦梗死后TDCS對腦梗死灶周圍區(qū)pannexin1表達(dá)的影響;
　　

19、 3.結(jié)合TDCS對腦梗死大鼠行為學(xué)影響的觀察，探討TDCS促進(jìn)神經(jīng)可塑性的機(jī)制。
　　 方法:
　　 1、選用9～10周齡雄鼠，體重300-350g，共120只。從成功復(fù)制的MCAO模型大鼠中用隨機(jī)數(shù)字表隨機(jī)選取80只，其中40只作為單側(cè)大腦中動脈閉塞組（MCAO組）即腦梗死對照組，40只作為TDCS治療組，其余MCAO模型大鼠備用。主要觀察時間點(diǎn)設(shè)為3天、7天、14天。
　　 具體分組如下:
　　 1

20、) MCAO組(n=40):線栓法阻斷MCAO。
　　 其中36只用于研究TDCS對樹突棘密度、對Pannexin1 mRNA表達(dá)、Neurocan mRNA表達(dá)的影響，分3個時間點(diǎn)（3天、7天、14天），每組12只。第3組（14天組）的大鼠中取8只，采用走平衡木實(shí)驗(yàn)在第3天、第7天、第14天進(jìn)行神經(jīng)功能評分。
　　 其余4只，其中1只用于TTC染色，1只用于Nissl染色，2只用于觀察Pannexin1和Neuroca

21、n在腦內(nèi)的分布。
　　 2) TDCS治療組(n=40):線栓法阻斷MCA+TDCS治療。具體實(shí)驗(yàn)動物分組方法與MCAO組相同。
　　 3)假手術(shù)組(n=40):僅暴露頸部動脈。具體實(shí)驗(yàn)動物分組方法與MCAO組相同。
　　 2、大鼠肢體運(yùn)動功能評定:采用走平衡木實(shí)驗(yàn)(beam walking test)對運(yùn)動協(xié)調(diào)功能進(jìn)行神經(jīng)功能評分。重復(fù)測量三次取平均值。
　　 3、TDCS刺激干預(yù)方法
　　 S

22、D大鼠MCAO后次日即給予直流電TDCS治療，采用G6805-2B型刺激儀（上海醫(yī)用電子儀器），參數(shù)設(shè)置為頻率10Hz，強(qiáng)度0.1mA，每天給予30分鐘。刺激電極位置:正極（上調(diào)興奮性）在耳間線后約2mm、中線偏右2-3mm，負(fù)極（下調(diào)興奮性）在耳間線前5mm、中線偏左2-3mm。在刺激的第3天、7天、14天分別選取相應(yīng)大鼠處死進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。
　　 4、Golgi染色在光學(xué)顯微鏡下觀察皮質(zhì)錐體神經(jīng)元從二級樹突基部開始每20μm

23、長度范圍內(nèi)的樹突棘個數(shù)，代表樹突棘密度。
　　 5、免疫組化檢測Pannexin1、Neurocan的表達(dá)分布，以及分別與MAP-2和GFAP的關(guān)系。
　　 6、熒光實(shí)時定量PCR檢測Pannexin1 mRNA、Neurocan mRNA的表達(dá)。
　　 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
　　 全部數(shù)據(jù)均采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件分析比較。
　　 研究TDCS對行為學(xué)的影響采用重復(fù)測量方差分析，組內(nèi)兩兩比較采用LSD

24、方法。
　　 研究TDCS對樹突棘密度、對Pannexin1 mRNA表達(dá)、Neurocan mRNA表達(dá)的影響采用析因設(shè)計(jì)方差分析，組內(nèi)兩兩比較采用LSD方法。
　　 P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果:
　　 1、TDCS對腦梗死后神經(jīng)功能的影響
　　 腦梗死后不同時間點(diǎn)之間(F=27.941，P＜0.001)、TDCS治療組和MCAO組之間(F=39.443，P＜0.001)的

25、評分差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，腦梗死后不同時間點(diǎn)與不同組別間無交互效應(yīng)(F=2.294，P=0.119)。MCAO組在不同時間之間的評分差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=7.824，P=0.005)，TDCS治療組在不同時間之間的評分差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=24.843，P＜0.001)。TDCS治療組與MCAO組之間第3天（t=2.688，P=0.018）、第7天(t=5.789，P＜0.001)、第14天(t=5.017，P＜0.001)的BWT評分差異

26、有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，TDCS治療組的評分均低于MCAO組，提示TDCS治療組肢體功能較MCAO組好。MCAO組內(nèi)BWT評分在第7天與第3天之間、第14天與第7天差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P值分別為0.170、0.20）;第14天BWT評分低于第3天，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.011)。TDCS組內(nèi)第7天BWT評分低于第3天，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.040); BWT評分在第14天與第7天之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.033);第14天BWT評分低

27、于第3天，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001)。
　　 2、TDCS對各組樹突棘的影響
　　 Golgi染色后通過光鏡觀察發(fā)現(xiàn)，SO組、MCAO組以及TDCS組的神經(jīng)樹突棘大多呈蘑菇狀。MCAO組的樹突棘表現(xiàn)出缺失、或稀少的樹突棘。析因設(shè)計(jì)方差分析顯示不同分組間樹突棘密度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=384.352，P＜0.001);而不同時間樹突棘密度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F=13.402，P＜0.001);干預(yù)因素（TDCS治療、

28、MCAO手術(shù)）和時間之間有交互效應(yīng)(F=4.509，P=0.002)。TDCS治療組、MCAO組以及SO組術(shù)后第3天(F=195.773，P＜0.001)、7天(F=112.039，P＜0.001)、14天(F=100.864，P＜0.001)的樹突棘密度差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在術(shù)后第3天、7天、14天時MCAO組、SO組之間神經(jīng)樹突棘密度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P值均小于0.001），MCAO組神經(jīng)樹突棘密度均較SO組降低。在術(shù)后第3天、7天

29、、14天時TDCS治療組與MCAO組之間神經(jīng)樹突棘密度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P值均小于0.001），TDCS治療組神經(jīng)樹突棘密度均較MCAO組增高。在術(shù)后第3天、7天、14天時TDCS組與SO組之間神經(jīng)樹突棘密度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值均小于0.05)。
　　 3、Pannexin1在腦內(nèi)的分布
　　 Pannexin1在全腦均有表達(dá)，梗死灶側(cè)陽性信號較非梗死灶側(cè)強(qiáng)。大鼠大腦皮層的V2MM第二視皮質(zhì)內(nèi)側(cè)內(nèi)區(qū)、V2ML第二視皮質(zhì)

30、內(nèi)側(cè)外區(qū)、Au1第一聽皮質(zhì)、AuV第二聽皮質(zhì)腹側(cè)區(qū)、海馬CA1/CA2/CA3/齒狀回(DG)、S1BF感覺皮質(zhì)桶狀區(qū)、PMCo皮質(zhì)后內(nèi)側(cè)杏仁核、PLCo皮質(zhì)后外側(cè)杏仁核、Pir梨形皮質(zhì)、PtA頂葉聯(lián)絡(luò)皮質(zhì)表達(dá)較強(qiáng);其主要分布在皮層6層結(jié)構(gòu)中的Ⅱ（外顆粒）層、Ⅲ（錐體細(xì)胞）層、Ⅳ（內(nèi)顆粒）層及Ⅴ（外錐體）層中。
　　 雙重免疫熒光標(biāo)記結(jié)果顯示:Pannexin1主要分布在皮層的錐體細(xì)胞、顆粒細(xì)胞中。Pannexin1與MAP-2

31、共定位后發(fā)現(xiàn):Pannexin1與MAP2均為陽性的細(xì)胞約占MAP2陽性細(xì)胞總數(shù)的80％～95％，可見Pannexin1在胞體及近端樹突中均有較強(qiáng)陽性信號表達(dá)，提示Pannexin1主要分布于神經(jīng)元胞膜，部分表達(dá)于胞漿。
　　 4、TDCS對Pannexin1表達(dá)的影響
　　 RT-PCR檢測腦梗死周圍區(qū)域Pannexin1 mRNA相對表達(dá)量的變化。析因設(shè)計(jì)方差分析顯示不同分組(F=237.734，P＜0.001)、不

32、同時間(F=34.868，P＜0.001)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，干預(yù)因素（TDCS治療、MCAO手術(shù)）和時間之間有交互效應(yīng)(F=45.483，P＜0.001)。TDCS治療組、MCAO組以及SO組術(shù)后第3天(F=77.498,P＜0.001)、7天(F=194.79,P＜0.001)、14天(F=70.962,P＜0.001)的Pannexin1 mRNA相對表達(dá)量差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。術(shù)后第3天、7天、14天時MCAO組與SO組Panne

33、xin1 mRNA相對表達(dá)量差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001)，MCAO組Pannexin1 mRNA相對表達(dá)量均高于假手術(shù)組。術(shù)后第3天TDCS治療組Pannexin1 mRNA表達(dá)量與MCAO組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.264)，術(shù)后第7天、14天時TDCS治療組Pannexin1 mRNA相對表達(dá)量與MCAO組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001)，術(shù)后第7天、14天時TDCS治療組Pannexin1 mRNA表達(dá)量較MCAO組降

34、低。在術(shù)后第3天、7天、14天時TDCS組與SO組Pannexin1 mRNA相對表達(dá)量差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 5、Neurocan在腦內(nèi)分布
　　 Neurocan陽性信號主要分布于梗死灶周圍區(qū)域。GFAP陽性區(qū)域顯示增生的膠質(zhì)細(xì)胞，Neurocan陽性區(qū)域呈不規(guī)則片狀分布，Neurocan和GFAP的雙標(biāo)結(jié)果提示Neurocan陽性區(qū)域要大于GFAP陽性區(qū)域，Neurocan陽性染色主要分布于膠質(zhì)

35、細(xì)胞及細(xì)胞間隙。
　　 6、TDCS對Neurocan表達(dá)的影響
　　 析因設(shè)計(jì)方差分析顯示不同分組(F=1986.124，P＜0.001)、不同時間(F=307.183，P＜0.001)梗死灶周圍Neurocan mRNA相對表達(dá)量差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，干預(yù)因素（TDCS治療、MCAO手術(shù)）和時間之間有交互效應(yīng)(F=118.138，P＜0.001)。TDCS治療組、MCAO組以及SO組術(shù)后第3天(F=594.946，P＜

36、0.001)、7天(F=2484.108,P＜0.001)、14天的Pannexin1 mRNA(F=204.715,P＜0.001)相對表達(dá)量差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在術(shù)后第3天、7天、14天時MCAO組與SO組Neurocan mRNA相對表達(dá)量差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001)，MCAO組Neurocan mRNA相對表達(dá)量均較SO組增加。在術(shù)后第3天、7天、14天時TDCS治療組與MCAO組Neurocan mRNA相對表達(dá)量差異

37、均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001)，TDCS治療組Neurocan mRNA相對表達(dá)量均較MCAO組降低。在術(shù)后3天、7天時TDCS治療組與SO組Neurocan mRNA相對表達(dá)量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001)，但在14天時TDCS治療組與SO組Neurocan mRNA相對表達(dá)量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.741)。
　　 結(jié)論:
　　 TDCS促進(jìn)腦梗死早期肢體功能康復(fù)的機(jī)制之一可能是增加了腦梗死后梗死灶周圍的樹突

38、棘密度，表明其改善神經(jīng)功能的重要機(jī)制之一是促進(jìn)了神經(jīng)可塑性。在腦梗死后的早期應(yīng)用TDCS會有更好的運(yùn)動功能恢復(fù)，而且能夠下調(diào)pannexin1 mRNA的表達(dá)。同時我們觀察到早期應(yīng)用TDCS可以抑制NeurocanmRNA的表達(dá)。
　　 1.腦梗死周圍區(qū)域樹突棘密度在腦梗死后呈現(xiàn)逐漸下降的趨勢，TDCS則促進(jìn)腦梗死后的樹突棘再生，使樹突棘密度增加;
　　 2.Pannexin1廣泛分布于大腦皮層、海馬，定位于胞膜，部分表