雙打擊淋巴瘤的臨床病理特征及其預(yù)后分析.pdf

1、背景與目的:
　　根據(jù)WHO(2008)分類中的定義，將同時具有Myc和Bcl-2或Bcl-6基因易位的B細(xì)胞淋巴瘤稱為雙打擊淋巴瘤(Double Hit lymphoma, DHL)，并且將同時具有三者基因易位的稱為三重打擊淋巴瘤(Triple-hit lymphoma, THL)。另一種B細(xì)胞淋巴瘤通過免疫組織化學(xué)方法檢測出同時具有MYC和BCL-2或BCL-6蛋白高表達(dá),這類淋巴瘤稱為雙表達(dá)淋巴瘤(Double-expres

2、sion lymphoma, DEL)。近年來,很多研究找尋MYC和BCL-2/BCL-6陽性表達(dá)的免疫組織化學(xué)最佳判斷閾值,通過免疫組織化學(xué)蛋白表達(dá)篩選基因易位,以確定在日常實(shí)踐中有風(fēng)險的患者需通過FISH檢測。
　　本研究通過FISH及IHC方法檢測實(shí)驗(yàn)組中DLBCL(Diffuse large B cell lymphoma)的Myc、 Bcl-2、 Bcl-6易位情況及相應(yīng)蛋白的表達(dá)情況，得出雙打擊淋巴瘤與雙表達(dá)淋巴瘤的臨

3、床及病理特征，探討兩者的聯(lián)系并探討其預(yù)后特征及診治方案。
　　方法:
　　1.收集資料：收集鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院2010年至2015年確診為DLBCL患者的石蠟包埋組織標(biāo)本，經(jīng)本科室兩位資深淋巴瘤醫(yī)師重新閱片診斷，并篩選出應(yīng)用CHOP方案或者R-CHOP方案的患者65例，組織微陣列技術(shù)（tissuemicroarray TMA）將65例標(biāo)本制成組織芯片。
　　2.整理資料：對篩選出來的65例DLBLC患者的臨床資料和病

4、理資料進(jìn)行回顧性分析，并且對患者進(jìn)行電話隨訪。
　　3.免疫熒光原位雜交：使用Vysis LSI MYC雙色，斷裂重排探針，Vysis LSI BCL6雙色，斷裂重排探針和Vysis LSI IGH/ BCL2雙重融合易位探針(Abbott Molecular, Abbott Park, IL)。使用配備有DP72照相機(jī)和DP2-BSW軟件(Olympus, Tokyo, Japan)的熒光顯微鏡(Olympus BX51, To

5、kyo, Japan)分析FISH信號。
　　4.免疫組織化學(xué)：檢測MYC、BCL-2、BCL-6、CD10、MUM-1、Ki-67蛋白的表達(dá)情況。
　　5.統(tǒng)計分析：使用SPSS17.0統(tǒng)計軟件統(tǒng)計分析。Pearson卡方檢驗(yàn)，連續(xù)性校正和 Spearman秩相關(guān)分析用于確定變量之間的關(guān)聯(lián)和相關(guān)性。使用Kaplan-Meier曲線繪制生存分析并使用對數(shù)秩檢驗(yàn)進(jìn)行比較。通過 Cox比例風(fēng)險回歸模型分析單變量和多變量生存分析。

6、當(dāng)雙側(cè)P＜0.05時，結(jié)果被認(rèn)為具有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1.臨床資料及隨訪：65例患者，其中男34例，女31例，男女性別之比為1.1:1，年齡4-81歲，平均年齡50.8歲，中位年齡為60歲。此組患者的AnnArbor分期為：I期21例，Ⅱ期29例，Ⅲ期10例，Ⅳ期5例。根據(jù)上述相關(guān)指標(biāo)計算患者的IPI評分，其中低危者32例，低／中危者18例，中／高危者10例，高危者5例。36例患者應(yīng)用CHOP方案(環(huán)磷酰胺+多柔

7、比星+長春新堿+潑尼松)，29例患者使用利妥昔單抗的R-CHOP方案，隨訪2至80個月，生存34例，死亡31例。
　　2. FISH結(jié)果：在所檢測的65例 DLBLC中 Myc基因易位病例(14/65)占DLBCL的21.5％；Bcl-2基因易位病例占18.5%(12/65)；Bcl-6基因易位占27.7%(18/65)；BCL-2/IGH基因易位病例占18.5%(12/65)。7例(10.8％)腫瘤樣品中 Myc基因重排是唯一的

8、易位。檢測出6例 DHL。其中4例(6.1％)具有 Myc和Bcl-2基因易位，2例(3.1％)Myc和Bcl-6基因易位。9例(13.8％)Bcl-2和Bcl-6的同時易位。1例(1.5％)中檢測到Myc、Bcl-2，Bcl-6基因的三重易位。
　　3.免疫組化結(jié)果：65例DLBCL中GCB病例16例，NON-GCB病例46例；在Myc基因易位病例中GCB占27.6%(3/16)， NON-GCB占68.8%(11/16)；在B

9、cl-2/IgH基因易位病例中GCB占26.3%(6/12)，NON-GCB占41.7%(5/12)，在Bcl-6基因易位病例中GCB占33.3%(4/120，NON-GCB占58.3%(7/12)。6例DHL患者中GCB占16.7%(1/6)，NON-GCB占83.3%（5/6）。一例THL為NON-GCB。
　　在所檢測的65例DLBCL中MYC蛋白，BCL-2蛋白，BCL-6蛋白的表達(dá)情況。顯示33例(50.1％)MYC蛋白

10、高表達(dá)，32例(49.2％)顯示BCL-2蛋白高表達(dá)，18例(27.7％)顯示BCL-6蛋白高表達(dá)。我們使用ROC曲線分析來確定百分比的最佳截止值的蛋白陽性細(xì)胞。MYC，BCL-2和BCL-6的最佳臨界值為≥50％，≥60％（等于預(yù)定閾值）和≥20％。Myc易位陽性病例（14例）中13例患者具有MYC蛋白高表達(dá)，特異性為90%。Bcl-2易位陽性病例（12例）有7例患者具有BCL-2蛋白高表達(dá)，特異性為58%。Bcl-2易位陽性病例（1

11、8例）有11例患者具有BCL-62蛋白高表達(dá)，特異性為61%。
　　4.預(yù)后分析：6位DHL患者中的3例使用R-CHOP方案治療，3例使用CHOP方案治療，兩組之間生存率并沒有特異性。6例DHL患者全部死亡，生存期2-19個月，預(yù)后極差。1例THL生存8個月。與MYC易位相反，BCL-2或BCL-6基因的斷裂并不能預(yù)測患者的OS和PFS。
　　在CHOP和R-CHOP隊(duì)列中分別評估了候選的預(yù)后因素。生存曲線顯示MYC蛋白高表

12、達(dá)在CHOP和R-CHOP組中與劣質(zhì)OS顯著相關(guān)。在CHOP隊(duì)列中，BCL-2高蛋白表達(dá)與不良OS顯著單獨(dú)相關(guān)，但是不在R-CHOP隊(duì)列中。然而，BCL-6蛋白高表達(dá)在R-CHOP隊(duì)列中是不良預(yù)后因素，但是不在CHOP隊(duì)列中。
　　接下來我們分析DHS和THS對兩個治療組中的DLBCL患者的預(yù)后影響。在單變量分析中，在 CHOP和 R-CHOP組中， MYC/BCL-2蛋白高表達(dá)， MYC/BCL-6蛋白高表達(dá)和MYC，BCL-2

13、和 BCL-6三高蛋白表達(dá)都與不良OS相關(guān)。在R-CHOP隊(duì)列中，當(dāng)共表達(dá)MYC蛋白時，BCL-2高蛋白表達(dá)僅與較差的OS相關(guān)。BCL-2/BCL-6高表達(dá)顯示有限的預(yù)后影響。在CHOP隊(duì)列中，并入IPI，免疫組織化學(xué)分組（GCB對NON-GCB），MYC，BCL-2和BCL-6蛋白的多變量 Cox回歸模型顯示 IPI，高 MYC蛋白表達(dá)和高 BCL2蛋白表達(dá)， MYC/BCL-2高蛋白表達(dá)，MYC/BCL-6高蛋白表達(dá)，BCL-2/B

14、CL-6高蛋白表達(dá)和三高蛋白表達(dá)獨(dú)立影響OS的預(yù)后值。在R-CHOP隊(duì)列中，并入IPI，MYC， BCL-2和 BCL-6蛋白的多變量 Cox回歸模型顯示：高 MYC蛋白表達(dá)，高M(jìn)YC/BCL-2 DHS，高M(jìn)YC/BCL6 DHS和高THS對于不良OS和PFS具有獨(dú)立的預(yù)后價值。高BCL2/BCL6 DHS同樣也是獨(dú)立的預(yù)后值。
　　兩組治療方案患者的Cox模型顯示，MYC高蛋白表達(dá)顯示與Myc基因斷裂沒有相關(guān)性， BCL-6高

15、蛋白表達(dá)顯示與Bcl-6斷裂沒有相關(guān)性, BCL-2高蛋白表達(dá)顯示與IGH/Bcl-2融合沒有相關(guān)性。并入變量Myc斷裂與DHS的Cox模型顯示，IHC組或FISH組模型中的隊(duì)列可以代表整個DHL患者人群并沒有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)論:
　　1. DHL與DEL患者具有高LDH水平，臨床分期多為Ⅲ-Ⅳ期，多個結(jié)外部位的侵及，和高IPI評分的臨床病理特征。
　　2.對于MYC，BCL-2和BCL-6蛋白表達(dá)，具有50％，6