IL-17A在大鼠房顫模型中的作用和機(jī)制研究.pdf

1、背景：
　　房顫是臨床上最常見的心律失常之一。近年來，一類新的輔助性T細(xì)胞亞群-Th17細(xì)胞(T help cell17，Th17)及其特異性效應(yīng)因子白介素-17(interleukin-17，IL17)備受關(guān)注，IL-17被證明是一種重要的炎癥反應(yīng)介質(zhì)。研究發(fā)現(xiàn)，IL-17在多種心血管疾病的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮了重要的作用，包括動脈粥樣硬化、慢性心力衰竭、急性冠狀動脈綜合征和病毒性心肌炎。但是目前關(guān)于IL-17與房顫發(fā)生相關(guān)的研究證據(jù)

2、尚較少。為探索IL-17是否是房顫的獨(dú)立危險(xiǎn)因素和重要的炎癥標(biāo)記物，本課題組前期通過配對的病例對照研究發(fā)現(xiàn)，外周血漿中IL-17A與房顫發(fā)生相關(guān)聯(lián)，且隨著因子水平增高，關(guān)聯(lián)強(qiáng)度越強(qiáng)，且可能通過影響心臟結(jié)構(gòu)重構(gòu)而影響房顫發(fā)生。但是IL-17A在房顫發(fā)生和維持中的具體作用和機(jī)制如何，外周血和心房組織中IL-17A水平是否存在一致性仍有待進(jìn)一步研究。
　　目的：
　　本課題利用SD大鼠，通過食道快速心房起搏的方法來構(gòu)建房顫動物模型

3、，進(jìn)一步探討IL-17與房顫發(fā)生的關(guān)聯(lián)，分析外周血中IL-17A水平與心房組織中是否存在一致性及二者與心房纖維化的相關(guān)性。同時(shí)，分析IL-17A與基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinase，MMP)、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑(tissue inhibitor metalloproteinase，TIMP)之間的相關(guān)性，進(jìn)一步驗(yàn)證IL-17A通過引起MMPs/TIMPs失衡誘導(dǎo)心房纖維化的機(jī)制。研究結(jié)果將為IL-17作為

4、房顫早期診斷和監(jiān)測疾病進(jìn)展的重要生物標(biāo)記物提供依據(jù)，也將為全面認(rèn)識房顫發(fā)生和維持的機(jī)制以及尋找新的治療靶點(diǎn)提供參考依據(jù)。
　　方法：
　　1.采用經(jīng)食道快速心房起搏的方法構(gòu)建大鼠房顫模型，比較分析房顫組與對照組心電數(shù)據(jù)的變化，包括QRS間期、QT間期等，以及兩組心房纖維化程度的改變。
　　2.通過酶聯(lián)免疫吸附法測定房顫組與對照組血漿中IL-17A與C反應(yīng)蛋白(c-reactive protein，CRP)水平的變化，以

5、及兩組血漿中MMP2、MMP9、TIMP2的水平。
　　3.采用免疫組化法測定兩組心房組織中IL-17A、MMP2、MMP9及TIMP2的水平。
　　4.采用Pearson相關(guān)分析的方法，分析血漿和心房組織中IL-17A的一致性及二者與心房纖維化的相關(guān)性，同時(shí)分析血漿和心房組織中MMP2、MMP9、TIMP2的一致性及三者與心房纖維化的相關(guān)性，血漿和心房組織中MMP2、MMP9、TIMP2與IL-17A的相關(guān)性。
　　

6、結(jié)果：
　　第一章 大鼠房顫模型的構(gòu)建
　　1.房顫組大鼠的心率顯著加快，正常時(shí)為（159.63±18.25）次/min，房顫發(fā)作時(shí)達(dá)（203.24±33.56）次/min，同時(shí)，QRS間期和QT間期明顯延長，分別由正常時(shí)的50.00±4.28ms，103.00±1.85ms增加至68.85±14.73ms和134.80±22.05ms，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　2.房顫組大鼠心房纖維化程度較對照組嚴(yán)重

7、，膠原容積分?jǐn)?shù)較對照組明顯升高[(18.15±9.45)％vs(6.51±4.49)％,P＜0.01]。
　　第二章 大鼠房顫模型中IL-17A的作用及其與心房纖維化的關(guān)聯(lián)研究
　　1.大鼠外周血血漿中IL-17A和CRP的水平與房顫的發(fā)生密切相關(guān)，且隨房顫發(fā)生次數(shù)的增多有上升趨勢。
　　2.房顫組大鼠心房組織中IL-17A的蛋白表達(dá)水平較對照組明顯升高(0.17±0.05vs0.04±0.01,P=0.003)。

8、r>　　3.房顫組大鼠外周血血漿中IL-17A水平與心房組織中IL-17A水平存在高度相關(guān)性(r=0.721，P=0.019)。血漿中IL-17A水平與心房纖維化呈正相關(guān)(r=0.830，P=0.003)，心房組織中IL-17A水平與心房纖維化也呈正相關(guān)(r=0.685，P=0.029)。
　　第三章 大鼠房顫模型中IL-17A與MMPs/TIMPs的關(guān)聯(lián)研究
　　1.尚未發(fā)現(xiàn)房顫組與對照組大鼠外周血血漿中MMP2、MMP9

9、、TIMP2水平存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　2.與對照組相比，房顫組大鼠心房組織中MMP2、MMP9水平明顯升高（0.12±0.05vs0.04±0.02，P=0.021;0.08±0.01vs0.03±0.01，P＜0.001），而TIMP2水平在房顫組明顯降低（0.02±0.00vs0.06±0.02，P=0.004）。
　　3.房顫組大鼠外周血血漿和心房組織中MMP2、MMP9、TIMP2的水平存在高度相關(guān)性，心房組織中MM

10、P9水平與心房纖維化呈正相關(guān)(r=0.809，P=0.005)，TIMP2水平與心房纖維化呈負(fù)相關(guān)（r=-0.884，P=0.001），未發(fā)現(xiàn)心房組織中MMP2水平與心房纖維化之間的相關(guān)性（r=0.599，P=0.067）。
　　4.房顫組大鼠外周血血漿中MMP9水平與IL-17A呈正相關(guān)（r=0.648，P=0.043），TIMP2水平與IL-17A呈負(fù)相關(guān)（r=-0.695，P=0.037），未發(fā)現(xiàn)血漿中MMP2與IL-17A

11、水平之間的相關(guān)性（r=0.576，P=0.082）。
　　5.房顫組大鼠心房組織中MMP2、MMP9與IL-17A水平均呈正相關(guān)(r=0.801，P=0.005;r=0.778，P=0.008)，TIMP2與IL-17A水平呈負(fù)相關(guān)（r=-0.841，P=0.002）。
　　結(jié)論：
　　通過大鼠房顫動物模型研究，發(fā)現(xiàn)IL-17A與房顫的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，IL-17A可能是通過影響MMPs/TIMPs平衡，引起心房結(jié)構(gòu)重