腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞通過分泌基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1調(diào)節(jié)肺癌A549細(xì)胞的化療耐藥性.pdf

1、肺癌嚴(yán)重危害人類健康，根據(jù)世界衛(wèi)生組織(WHO)2008年公布的資料顯示，肺癌的年死亡人數(shù)(140萬)和年發(fā)病人數(shù)(160萬)，均排在全球癌癥第一位。在我國，肺癌是癌癥死亡的首要病因，過去30年記錄的肺癌死亡率上升了464.8％，且發(fā)病率及死亡率還在逐年增長。英國著名腫瘤學(xué)家R.Peto預(yù)言:如果中國不及時控制空氣污染和吸煙，到2025年中國肺癌發(fā)病人數(shù)將超過100萬/年，穩(wěn)居世界第一位。腫瘤微環(huán)境通過與腫瘤細(xì)胞相互作用，在腫瘤發(fā)展、耐

2、藥和轉(zhuǎn)移等方面起著關(guān)鍵作用。所以本研究以腫瘤微環(huán)境中的主要組成部分-腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞和肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549為模型，探索腫瘤微環(huán)境在腫瘤耐藥性方面的作用和相關(guān)機(jī)制。
　　探討腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞(CAF)是否通過分泌基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1(SDF-1)調(diào)節(jié)肺癌A549細(xì)胞的化療耐藥性。
　　采用原代細(xì)胞分離方法獲得肺癌患者的CAF，采用四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)檢測A549的細(xì)胞增殖能力和對化療藥物的耐藥性，熒光定量PCR檢測Bcl-

3、xl mRNA水平，Western blot檢測Bcl-xl蛋白水平，酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測CAF分泌SDF-1的情況。CAF可以促進(jìn)肺癌A549細(xì)胞的增殖，而NF對A549細(xì)胞增殖的影響不明顯。培養(yǎng)72h后，A549+CAF上清組的A值為0.814±0.006，與A549+NF上清組(0.753±0.006)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　熒光定量PCR檢測結(jié)果顯示，A549組、A549+NF上清組和A54

4、9+CAF上清組的Bcl-xlmRNA表達(dá)水平分別為1.00±0.11、1.10±0.09和3.50±0.30，A549+CAF上清組與A549+NF上清組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。Western blot檢測顯示，A549組、A549+NF上清組和A549+CAF上清組的Bcl-xl蛋白表達(dá)水平分別為1.00±0.08、1.10±0.12和3.10±0.25，A549+CAF上清組與A549+NF上清組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)

5、意義(P＜0.05)。ELISA檢測顯示，A549+NF上清組和A549+CAF上清組中SDF-1含量分別為3.23±0.02和9.53±0.10，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05）。
　　MTT檢測顯示，A549組、A549+AMD3100組、A549+NF上清組、A549+NF上清+AMD3100組、A549+CAF上清組和A549+CAF上清+AMD3100組的A值分別為0.43±0.03、0.25±0.02、0.48±0.0