miR-29b對與A549細胞共培養(yǎng)的人胚肺成纖維細胞抗纖維化作用的研究.pdf

1、目的：
　　特發(fā)性肺纖維化（idiopathic pulmonary fibrosis，IPF）是一種慢性進展性的病因不明的肺部疾病，且缺乏有效的治療手段。過多的肺成纖維細胞、肌成纖維細胞聚集和細胞外基質(zhì)的過度沉積是IPF的重要病理特點。microRNA是一種小分子非編碼的RNA，在體內(nèi)眾多生理病理過程中扮演重要的角色。研究表明microRNA同樣參與IPF的發(fā)病機理。本研究通過觀察miR-29b對與A549細胞共培養(yǎng)的人胚肺成纖

2、維細胞（MRC-5）合成I型膠原蛋白（Collagen I，Col I）的影響，探討其在抗肺纖維化中的作用，為探尋IPF新的治療靶點提供一定的研究依據(jù)。
　　方法：
　　應用Transwell小室構(gòu)建MRC-5與A549細胞跨室共培養(yǎng)模型，利用脂質(zhì)體介導法將miR-29b轉(zhuǎn)染至MRC-5細胞以及使用TGF-β1刺激相應細胞組，并設空白對照組，TGF-β1刺激組，miR-29b陰性轉(zhuǎn)染對照+TGF-β1刺激組，miR-29b轉(zhuǎn)

3、染+TGF-β1刺激組，miR-29b轉(zhuǎn)染組。通過實時定量PCR法檢測各組細胞中Col I和miR-29b的mRNA相對表達水平。Western blotting法檢測各組細胞中Col I蛋白表達水平。
　　結(jié)果：
　　（1）PCR檢測分析顯示，與空白對照組相比，miR-29b在轉(zhuǎn)染組表達水平增加了127倍（P<0.01），使用Lipofectamin2000在MRC-5細胞轉(zhuǎn)染組中過表達miR-29b成功。
　　（2

4、）通過PCR檢測分析顯示與TGF-β1刺激組和miR-29b陰性轉(zhuǎn)染+TGF-β1刺激組相比，miR-29b轉(zhuǎn)染+TGF-β1刺激組中Col I表達降低（P<0.05）。
　　（3）Western blotting法檢測各組細胞Col I蛋白表達，miR-29b轉(zhuǎn)染+TGF-β1刺激組中Col I表達較TGF-β1刺激組和miR-29b陰性轉(zhuǎn)染+TGF-β1刺激組相比表達降低（P<0.05）
　　結(jié)論：
　　實驗表明在