胰島素緩解膿毒癥相關(guān)小腸上皮功能障礙涉及解偶聯(lián)蛋白-2表達下調(diào).pdf

1、膿毒癥是高發(fā)病率和高致死率疾病。胃腸道一方面是膿毒癥最常見的受累器官，另一方面，胃腸功能障礙本身可引起或者加重膿毒癥，因腸道屏障受損，腸道內(nèi)細菌等物質(zhì)可跨過黏膜屏障進入機體循環(huán)，誘導(dǎo)多臟器功能障礙。極化液具有抗炎等作用，主要活性成份為胰島素。解偶聯(lián)蛋白2(UCP2)在胃腸道廣泛表達，最新的研究表明，它在膿毒癥時表達上調(diào)，可增加游離脂肪酸的合成，通過順序活化蛋白激酶B(PKB)、p38絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)、NLRP3/ASC/C

2、aspase1信號通路，誘導(dǎo)促炎反應(yīng)。
　　研究目的：
　　評估胰島素對膿毒癥相關(guān)小腸上皮功能障礙的作用，了解UCP2在其中的作用。
　　研究方法：
　　構(gòu)建體內(nèi)及體外兩種膿毒癥模型。體內(nèi)模型選用SD大鼠，采用盲腸結(jié)扎穿孔(CLP)方法構(gòu)建，分為空白組、假手術(shù)組、CLP處理組、CLP+極化液(GIK)治療組、CLP+糖鉀液(GK)治療組。研究內(nèi)容包括72小時大鼠死亡率、血清IL-1β/TNF-α水平、回腸組織IL

3、-1β/TNF-β/IL-6/IL-10水平、回腸組織上皮病理HE染色結(jié)果（Chiu's評分法）、回腸組織滲透性變化（血清FD-4法）、回腸組織緊密連接蛋白ZO-1/Occludin/Claudin-1表達水平、回腸組織UCP2和NLRP3mRNA情況、回腸組織UCP2、NLRP3和Caspase1p10蛋白表達水平。
　　體外模型采用人結(jié)直腸腺癌細胞株(Caco2)構(gòu)建。體外細胞滲透性采用單層腸上皮細胞模型滲透性實驗。采用0ug

4、/ml、0.1ug/ml、1.0ug/ml、10ug/ml、100ug/ml不同濃度的脂多糖(LPS)溶液處理Caco2細胞，研究單層腸上皮細胞模型滲透性大小、UCP2和p-p38MAPK蛋白表達水平;100ug/ml LPS溶液預(yù)處理Caco2細胞，其后給予1.0nmol/ml、10nmol/ml、100nmol/ml的胰島素治療，24小時后研究單層腸上皮細胞模型滲透性大小、UCP2和p-p38MAPK蛋白表達水平。
　　研究結(jié)

5、果：
　　1、胰島素能夠降低膿毒癥大鼠死亡率，降低膿毒癥大鼠的血清促炎因子beta IL-1和alpha TNF水平;
　　2、胰島素能夠降低膿毒癥大鼠回腸組織炎癥水平，緩解腸道上皮組織損害;
　　3、胰島素能夠降低膿毒癥大鼠回腸屏障功能損害，增加膿毒癥大鼠回腸腸道上皮緊密連接蛋白ZO-1、Claudin-1和Occludin的表達水平;
　　4、胰島素可以降低UCP2和NLRP3mRNA相對表達量，誘導(dǎo)UCP2

6、蛋白、NLRP3蛋白和Caspase1p10蛋白表達下調(diào);
　　5、不同濃度LPS刺激Caco2細胞，Caco2細胞單層腸上皮細胞模型滲透性呈濃度依賴性增加，UCP2和p-p38MAPK蛋白呈濃度依賴性表達上調(diào);
　　6、不同濃度胰島素刺激LPS預(yù)處理的Caco2細胞，Caco2細胞單層腸上皮細胞模型滲透性呈濃度依賴性下降，UCP2和p-p38MAPK蛋白呈濃度依賴性表達下調(diào)。
　　研究結(jié)論：
　　胰島素可以降低