長鏈非編碼RNA PCAT-1在肝癌侵襲轉(zhuǎn)移中的機制研究.pdf

1、J I l l ] 1 1 1 ] I l l I I I l l s I J I I I I I ] 1 1 】1Y 3 3 3 1 2 2 4 ；分類號：U D C ：密級：學號：4 0 6 5 2 0 4 1 2 3 6 5南昌大學碩士研究生學位論文長鏈非編碼R N A P C A T - 1 在肝癌侵襲轉(zhuǎn)移中的機制研究T h eS t u d y o f L o n g N o n - —c o d i n g R N A P

2、C A T —- 1I n v o l v i n gi nM e t a s t a s i so f H e p a t o c e l l u l a rC a r c i n o m a張德元培養(yǎng)單位( 院、系) ·：， 南昌大學第二附屬醫(yī)院指導教師姓名、職稱：一劉繁榮教授主任醫(yī)師申請學位的學科門類： 基礎醫(yī)學學科專業(yè)名稱： 病理與病理生理學論文答辯日期： 2 0 1 7 年5 月答辯委員會主席：評閱人：2 0 1 7

3、 年5 月 釜摘要摘要目的：為了探索長鏈非編碼R N A ( I n c R N A ) 前列腺癌相關(guān)性轉(zhuǎn)錄本1 ( P C A T - 1 ) 在肝癌侵襲轉(zhuǎn)移的機制，我們檢測了P C A T - 1 在肝癌組織及細胞株中的表達差異，并探討其與肝癌臨床分期，病理分級之間的關(guān)系。檢測P C A T - 1 沉默對肝癌細胞侵襲遷移能力的影響。通過構(gòu)建P C A T - 1 和H M G B l 熒光素酶載體，探索P C A T - 1是否能

4、夠作為競爭性內(nèi)源性R N A ( c e R N A ) 抑制m i R 一1 2 9 —5 p 的功能，從而提高m i R 一1 2 9 。5 p 的靶基因H M G B l 的表達。而這種I n c R N A —m i R N A —m R N A 提高了我們對肝癌侵襲轉(zhuǎn)移機制的認識，P C A T - 1 ．m i R ．1 2 9 —5 p —H M G B l 通路也將為肝癌的診斷及治療提供了新的思路。方法：收集2 0 1

5、2 ．0 8 —2 0 1 6 ．0 4 期間在南昌大學第二附屬醫(yī)院肝膽外科行肝部分切除術(shù)( 術(shù)前未放療或化療) ，術(shù)后確診為肝細胞肝癌患者的肝癌組織和相應的癌旁正常肝臟組織，整理患者的臨床病理資料。選用T r i z o l 法提取總R N A ，定量后逆轉(zhuǎn)錄成c D N A ，利用實時熒光定量P C R ( Q u a n t i t a t i v e r e a l —t i m eP C R ，q P C R )檢測肝癌組織、

6、癌旁組織及肝癌細胞株中的P C A T - 1 的表達，并結(jié)合統(tǒng)計學方法進行分析。在體外實驗中，①構(gòu)建s i R N A 載體，研究P C A T - 1 沉默對肝癌細胞株H e p G 2 和L M 3 遷移及侵襲能力影響。劃痕實驗檢測細胞遷移，t r a n s w e l l 實驗檢測細胞遷移和侵襲。②結(jié)合生物信息學數(shù)據(jù)庫m i R c o d e ，U C S C ，T a r g e t S c a n 提供的信息，構(gòu)建P C

7、 A T - 1 和H M G B l 的熒光質(zhì)粒，運用熒光素酶報告實驗檢測P C A T - 1 ．m i R - 1 2 9 —5 p 和H M G B l ．m i R - 1 2 9 ．5 p 的關(guān)系。③研究P C A T - 1 沉默對m i R - 1 2 9 —5 p 表達的影響，研究P C A T - 1 沉默對H M G B l 的表達的影響。免疫組化及W e s t e r n b l o t 檢測H M G B l