長鏈非編碼RNA SPRY4-IT1在膀胱癌的表達(dá)及功能研究.pdf

1、背景：在泌尿系統(tǒng)中，膀胱惡性腫瘤是最常見的腫瘤，威脅人類健康。盡管目前膀胱癌的診斷治療取得了巨大的進(jìn)步，但仍有許多問題未能解決，其發(fā)病率較高并且逐年增高，同樣復(fù)發(fā)率、轉(zhuǎn)移率以及死亡率居高不下，造成社會(huì)沉重的治療負(fù)擔(dān)，膀胱癌是難以徹底治愈的癌癥疾病之一。手術(shù)治療適于早中期膀胱癌患者，但容易復(fù)發(fā)；膀胱癌晚期多出現(xiàn)盆腔淋巴結(jié)等轉(zhuǎn)移，已不適宜手術(shù)，多采用放化療、生物治療等姑息治療措施，患者的死亡率高。進(jìn)一步研究膀胱癌發(fā)病機(jī)制、探究新的診療方案具

2、有重要臨床應(yīng)用意義，尤其對(duì)易復(fù)發(fā)的膀胱癌患者以及放化療不敏感的晚期姑息治療的患者有重要臨床意義。長鏈非編碼RNA轉(zhuǎn)錄本長度大于200 bp，LncRNA雖不翻譯、不編碼蛋白，與腫瘤生長和患者預(yù)后等相關(guān)，科研工作者們研究發(fā)現(xiàn)大量LncRNA在人類腫瘤等疾病的發(fā)生進(jìn)展中l(wèi)ncRNA起著重要的調(diào)控作用，重新審視lncRNA在腫瘤等疾病中的作用，徹底摒棄過去視lncRNA為轉(zhuǎn)錄噪音的錯(cuò)誤認(rèn)識(shí);且編碼RNA分子數(shù)量遠(yuǎn)少于功能廣泛的非編碼的lncR

3、NA，因此lncRNA的表達(dá)與人類疾病特別是腫瘤疾病的內(nèi)在聯(lián)系越來越引起人們的重視。SPRY4內(nèi)含子轉(zhuǎn)錄本1( SPRY4-IT1)（基因 ID：100642175）是目前眾多l(xiāng)ncRNA中研究較成熟的一種，在各腫瘤疾病中功能機(jī)制研究較為深入，在之前的文獻(xiàn)中報(bào)道其異常表達(dá)與乳腺癌、胃癌、肺癌、腎癌和腦腫瘤等多種人類腫瘤疾病密切相關(guān)，表明可能是與人類癌癥疾病相關(guān)聯(lián)的一類必要的疾病發(fā)生因子，或可作為檢測(cè)腫瘤疾病的新的生物學(xué)指標(biāo)，仍需要在臨床

4、實(shí)踐中進(jìn)一步的驗(yàn)證。
　　目的：研究SPRY4-IT1在膀胱癌的表達(dá)及其意義，并探索SPRY4-IT1在膀胱癌細(xì)胞及膀胱正常上皮細(xì)胞功能。
　　方法：收集膀胱癌組織標(biāo)本及其配對(duì)的癌旁正常組織標(biāo)本，使用實(shí)時(shí)qRT-PCR法檢測(cè)SPRY4-IT1在膀胱組織標(biāo)本和細(xì)胞相對(duì)表達(dá)水平并分析其臨床病理特征之間關(guān)聯(lián)；使用特異性的小干擾RNA( si-SPRY4-IT1)轉(zhuǎn)染兩種膀胱癌細(xì)胞，以及過表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1-SPRY4-IT1

5、轉(zhuǎn)染正常膀胱上皮細(xì)胞,使用實(shí)時(shí)qRT-PCR法檢測(cè)si-SPRY4-IT1和pcDNA3.1-SPRY4-IT1效果，再分別以CCK-8實(shí)驗(yàn)、MTT實(shí)驗(yàn)、劃痕實(shí)驗(yàn)、ELISA實(shí)驗(yàn)和流式實(shí)驗(yàn)檢測(cè)si-SPRY4-IT1對(duì)膀胱癌細(xì)胞以及pcDNA3.1-SPRY4-IT1對(duì)正常膀胱上皮細(xì)胞在增殖、遷移和凋亡等方面的影響。
　　結(jié)果：相對(duì)于膀胱癌旁組織標(biāo)本，SPRY4-IT1在膀胱癌組織標(biāo)本中高表達(dá)
　?。?8.33％，P=0.0

6、263），SPRY4-IT1表達(dá)水平與病理分級(jí)(P<0.05)和TMN分期(P<0.001)有關(guān)，與年齡性別等無關(guān)，同時(shí)相對(duì)于正常膀胱上皮細(xì)胞SV-HUC-1， SPRY4-IT1也在5637（P=0.00229）和T24（P=0.00012）兩種膀胱細(xì)胞中明顯高表達(dá)。特異的小干擾RNA si-SPRY4-IT1可顯著降低SPRY4-IT1表達(dá)(P<0.001)，特異的小干擾RNA si-SPRY4-IT1可顯著抑制兩種膀胱細(xì)胞的增殖(

7、P<0.001)、遷移(P<0.01)和增加凋亡(P<0.01)。PcDNA3.1-SPRY4-IT1可顯著上調(diào)SPRY4-IT1表達(dá)(P<0.001)，可促進(jìn)膀胱上皮細(xì)胞的增殖(P<0.05)、遷移(P<0.001)和抑制凋亡(P<0.01)。
　　結(jié)論：SPRY4-IT1在膀胱癌標(biāo)本組織和細(xì)胞水平相對(duì)高表達(dá)，與膀胱的癌的組織病理學(xué)分級(jí)、臨床TNM分期相關(guān)，具有促進(jìn)膀胱癌細(xì)胞生長的作用，參與到膀胱癌細(xì)胞的生長過程調(diào)控等，在膀胱癌