黃芪甲苷預處理對大鼠肝臟缺血再灌注損傷及自噬的影響.pdf

1、目的
　　肝癌、肝移植等肝臟外科手術往往面臨肝臟缺血再灌注損傷的難題，明顯增加了肝臟外科手術的難度和風險。本實驗在建立大鼠肝臟缺血再灌注模型的基礎上，術前予黃芪甲苷預處理。通過對術后4h、8h、16h血清轉(zhuǎn)氨酶、炎性相關因子的檢測及肝組織顯微結構的觀察，判斷黃芪甲苷預處理對大鼠肝臟缺血再灌注損傷是否具有保護作用。用Western Blot及免疫組化染色分析各組大鼠肝組織中自噬相關蛋白Beclin-1的表達;電鏡下觀察各組大鼠肝臟細

2、胞內(nèi)自噬小體數(shù)量的變化。探討缺血再灌注后大鼠肝臟自噬水平的變化，以及黃芪甲苷預處理對大鼠肝臟缺血再灌注損傷可能存在的作用機制，為減輕患者肝臟缺血再灌注損傷提供潛在的理論依據(jù)。
　　方法
　　實驗分組:90只純系SD大鼠，隨機分為假手術組（Sham組），肝臟缺血再灌注組（HIRI組）、黃芪甲苷組（干預組），每組30只。再按術后4h、8h、16h三個時間段，每個時間段各10只。Sham組大鼠行腹腔注射麻醉后，腹部正中縱形切口，分

3、離肝蒂，不建立肝臟缺血再灌注模型。HIRI組和干預組大鼠麻醉后，建立肝臟缺血再灌注模型。干預組大鼠術前予黃芪甲苷溶液腹腔注射，1次/天，連續(xù)7天。
　　觀察指標:各組大鼠分別在術后4h、8h、16h采取血液和肝臟組織標本。用全自動生化分析儀檢測各組大鼠血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)水平;用ELISA法測定大鼠血清炎性相關因子TNF-α，IL-6水平;使用蘇木精-尹紅(HE)染色后，觀察各組肝臟組織病理學變化;We

4、stern Blot及免疫組化染色分析肝組織中自噬相關蛋白Beclin-1的表達;電鏡下觀察肝臟細胞內(nèi)自噬小體數(shù)量的變化。
　　結果
　　1.血清中轉(zhuǎn)氨酶水平的變化:同Sham組大鼠比較，HIRI組大鼠血清中ALT和AST水平在術后4h、8h、16h均明顯升高(P＜0.05)，于再灌注后8h時達到頂峰。與HIRI組大鼠比較，干預組大鼠血清ALT和AST水平在術后4h、8h、16h均明顯降低(P＜0.05)。
　　2.血

5、清中炎性相關因子水平的變化:同Sham組大鼠比較，HIRI組大鼠血清中TNF-α，IL-6水平在術后4h、8h、16h均明顯升高(P＜0.05)，于再灌注后8h達到頂峰。與HIRI組大鼠比較，干預組大鼠血清TNF-α，IL-6水平在術后4h、8h、16h均明顯降低(P＜0.05)。
　　3.肝組織HE染色后觀察:Sham組大鼠肝細胞索排列整齊、肝小葉結構清晰、中央靜脈區(qū)無淤血、無炎性細胞浸潤。HIRI組大鼠在再灌注后4h、8h、1

6、6h，出現(xiàn)了不同程度的肝細胞索排列紊亂、中央靜脈區(qū)淤血、肝小葉結構模糊、炎性細胞浸潤和肝細胞的水腫、壞死，其中以再灌注后8h的損傷最為嚴重。與HIRI組大鼠相比，干預組大鼠的肝臟組織病理變化在術后4h、8h、16h均有明顯改善。
　　4.肝組織自噬相關蛋白Beclin-1表達水平的變化:同Sham組大鼠比較，HIRI組大鼠Beclin-1蛋白的灰度比在術后4h、8h、16h均明顯升高(P＜0.05)，于再灌注后8h達到頂峰。與HI

7、RI組大鼠比較，干預組大鼠Beclin-1蛋白的灰度比在術后4h、8h、16h均明顯降低(P＜0.05)。
　　5.免疫組化染色分析肝組織中Beclin-1的表達:與Sham組大鼠相比，HIRI組大鼠肝臟組織Beclin-1的平均標記指數(shù)(LI)在術后8h明顯升高(P＜0.05)。與HIRI組大鼠相比，干預組大鼠肝臟組織Beclin-1平均LI在術后8h明顯降低(P＜0.05)。
　　6.肝臟細胞自噬小體數(shù)量的變化:與Sha

8、m組大鼠比較，HIRI組大鼠肝臟細胞的自噬小體數(shù)量在術后8h明顯上升(P＜0.05);與HIRI組大鼠比較，干預組大鼠肝臟細胞的自噬小體在術后8h明顯減少(P＜0.05)。
　　結論
　　本實驗結果提示黃芪甲苷預處理可以降低大鼠肝臟缺血再灌注后轉(zhuǎn)氨酶水平并減輕炎癥反應，同時肝組織HE染色觀察結果也顯示黃芪甲苷預處理能明顯減輕大鼠肝臟的病理損傷程度，由此推斷黃芪甲苷預處理能夠減輕大鼠肝臟缺血再灌注損傷。本研究還發(fā)現(xiàn)缺血再灌注后