EFEMP2對(duì)子宮內(nèi)膜癌侵襲轉(zhuǎn)移作用的研究.pdf

1、研究依據(jù)：
　　子宮內(nèi)膜癌(endometrial carcinoma，EC)是在女性生殖系統(tǒng)發(fā)生的惡性腫瘤，盡管早期子宮內(nèi)膜癌患者的預(yù)后相對(duì)理想，但是超過(guò)30％的患者在發(fā)現(xiàn)時(shí)已處于腫瘤晚期，并且部分患者伴隨局部、盆腔甚至遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移，因此預(yù)后不良。腫瘤轉(zhuǎn)移是造成患者死亡的主要原因，因此探索子宮內(nèi)膜癌的侵襲、轉(zhuǎn)移機(jī)制，進(jìn)一步闡明腫瘤的發(fā)展過(guò)程顯得尤為迫切。近年來(lái)，多種生物標(biāo)記物已被證實(shí)與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)展有關(guān)，但EFEMP2在子宮內(nèi)膜癌

2、細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移過(guò)程中的作用尚未見(jiàn)報(bào)道。
　　EFEMP2(EGF containing fibulin-like extracellular matrix protein2)是一種細(xì)胞外基質(zhì)蛋白，主要參與彈性纖維的合成與排列。EFEMP2與皮膚松弛癥、主動(dòng)脈夾層、骨關(guān)節(jié)炎、惡性腫瘤等多種疾病有關(guān)。為了探索EFEMP2在子宮內(nèi)膜癌增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移中的作用，本研究首次探討EFEMP2在子宮內(nèi)膜癌組織及細(xì)胞系中的表達(dá)情況及相關(guān)機(jī)制。

3、>　　研究目的：
　　1.探究EFEMP2在子宮內(nèi)膜癌組織、細(xì)胞中的表達(dá)及其意義。
　　2.探究慢病毒轉(zhuǎn)染后不同侵襲能力子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞的功能轉(zhuǎn)變。
　　3.探究EFEMP2對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的作用機(jī)制。
　　研究方法：
　　1.免疫組化(IHC)探究EFEMP2在正常子宮內(nèi)膜組織及子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)情況;
　　2.單細(xì)胞克隆技術(shù)，從KLE、 ISK中分離出具有高侵襲能力的克隆細(xì)胞亞系KLE-

4、1、ISK-1和低侵襲能力的克隆細(xì)胞亞系KLE-28、ISK-23;
　　3.逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-qPCR)、免疫印跡(Western blot)、免疫細(xì)胞化學(xué)(ICC)檢測(cè)EFEMP2在正常子宮內(nèi)膜、子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系(KLE、ISK、HEC-1A、HEC-1B)以及克隆細(xì)胞亞系中的表達(dá)情況;
　　4.生長(zhǎng)曲線、軟瓊脂克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系(KLE、ISK、HEC-1A、HEC-1B)以及克隆細(xì)胞亞系的增殖

5、能力;
　　5.Transwell侵襲轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)檢測(cè)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系(KLE、 ISK、 HEC-1A、HEC-1B)以及克隆細(xì)胞亞系的侵襲轉(zhuǎn)移能力;
　　6.慢病毒介導(dǎo)EFEMP2在高侵襲克隆細(xì)胞亞系過(guò)表達(dá)及RNA干擾沉默EFEMP2在低侵襲克隆細(xì)胞亞系表達(dá)，并驗(yàn)證轉(zhuǎn)染效率;
　　7.建立裸鼠移植瘤模型，體內(nèi)模擬子宮內(nèi)膜癌發(fā)展過(guò)程，進(jìn)一步探究EFEMP2在子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移過(guò)程中的作用;
　　8.We

6、stern blot、RT-qPCR檢測(cè)EFEMP2與子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)之間的關(guān)系。
　　研究結(jié)果：
　　1.EFEMP2在正常子宮內(nèi)膜組織中陽(yáng)性表達(dá)率高，在子宮內(nèi)膜癌組織中陽(yáng)性表達(dá)率低(P＜0.05); EFEMP2的表達(dá)情況與子宮內(nèi)膜癌組織分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、以及不良預(yù)后密切相關(guān)(P＜0.05）;
　　2.EFEMP2在正常子宮內(nèi)膜細(xì)胞中高表達(dá)，在子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞中低表達(dá);在高侵襲克隆細(xì)胞亞系中低表達(dá)

7、，在低侵襲克隆細(xì)胞亞系高表達(dá)(P＜0.05);
　　3.慢病毒介導(dǎo)EFEMP2過(guò)表達(dá)后高侵襲克隆細(xì)胞增殖能力、侵襲和轉(zhuǎn)移能力減弱;RNA干擾沉默EFEMP2表達(dá)后低侵襲克隆細(xì)胞增殖能力、侵襲和轉(zhuǎn)移能力增強(qiáng)(P＜0.05);
　　4.裸鼠移植瘤模型:高侵襲克隆細(xì)胞亞系組腫瘤生長(zhǎng)速度快，體積大，低侵襲克隆細(xì)胞亞系組腫瘤生長(zhǎng)速度慢，體積小;EFEMP2過(guò)表達(dá)組成瘤率較低，瘤體體積小，肺轉(zhuǎn)移率低，EFEMP2干擾組成瘤率高，瘤體體積

8、大，肺轉(zhuǎn)移率高（P＜0.05）;
　　5.EFEMP2過(guò)表達(dá)組E-cadherin表達(dá)升高，N-cadherin、Vimentin、Snail、Slug、Twist的表達(dá)降低，抑制EMT; EFEMP2干擾組，E-cadherin表達(dá)降低，Vimentin、Snail、Slug、Twist的表達(dá)升高，促進(jìn)EMT(P＜0.05)。
　　研究結(jié)論：
　　1.EFEMP2是子宮內(nèi)膜癌的一個(gè)抑癌因子，能夠抑制子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞侵襲