基于血管活性腸肽探討“肺腸合治法”治療干燥綜合征的機(jī)制.pdf

1、目的:
　　理論研究主要從祖國(guó)醫(yī)學(xué)“肺與大腸相表里”理論探討治療干燥綜合征的理論依據(jù)，并總結(jié)出基于“肺腸合治法”下的五大具體治法，為臨床治療提供理論依據(jù);實(shí)驗(yàn)研究主要基于血管活性腸肽(VIP)探討“肺腸合治”法中藥（麥冬地芍湯）治療干燥綜合征的機(jī)制，重點(diǎn)研究“肺腸合治法”法中藥（麥冬地芍湯）是否可以調(diào)節(jié)機(jī)體內(nèi)Th1/Th2、Th17/Treg的免疫失衡狀態(tài);另外通過(guò)給予小鼠受體拮抗劑，研究“肺腸合治”法是否通過(guò)VIP途徑發(fā)揮作用，

2、而達(dá)到調(diào)節(jié)Th1/Th2、Th17/Treg免疫失衡狀態(tài)。
　　根據(jù)中醫(yī)學(xué)“肺與大腸相表里”的理論，在臨床運(yùn)用“肺腸合治法”（麥冬地芍湯）治療干燥綜合征取得較好療效的基礎(chǔ)上，從對(duì)血管活性腸肽(VIP)的調(diào)節(jié)作用探討其作用機(jī)制，觀察麥冬地芍湯對(duì)Th1/Th2、Th17/Treg免疫失衡狀態(tài)的調(diào)控作用。
　　方法:
　　選取90只雌性NOD/Ltj小鼠在第9周齡時(shí)隨機(jī)取出10只小鼠，取血、頜下腺以及脾臟組織;其余部分NOD

3、小鼠隨機(jī)分為4組，分別為NS+PBS組、中藥+PBS組、NS+VIP拮抗劑組、中藥+VIP拮抗劑組。在16、20周齡時(shí)分別采集血清、頜下腺及脾臟組織，脾臟組織提取脾臟原代淋巴細(xì)胞，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)小鼠脾臟中Th1、Th2、Th17及Treg細(xì)胞占比，另外利用CBA和ELISA法檢測(cè)小鼠血清中細(xì)胞因子，HE染色觀察小鼠頜下腺組織病理形態(tài)學(xué)改變，Realtime PCR技術(shù)檢測(cè)小鼠頜下腺VIP水平，然后進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果:

4、>　　1.血清中Th1、2、17及Treg細(xì)胞因子:在小鼠16、20周齡時(shí)，與基線組相比，IFN-γ/IL-10比值呈逐漸升高的趨勢(shì)，且P＜0.01;與對(duì)照組相比，中藥組IFN-γ/IL-10比值均降低(P＜0.05);與中藥組相比，16周齡中藥+VIP受體拮抗劑組小鼠IFN-γ/IL-10比值升高(P＜0.05)，20周齡中藥+VIP受體拮抗劑組IFN-γ/IL-10比值無(wú)明顯變化。小鼠16周齡時(shí)，與基線組相比，IL-17/TGF-β

5、比值明顯升高的，且P＜0.01;與16周齡相比，20周齡IL-17/TGF-β比值卻明顯下降(P＜0.01);在小鼠16、20周齡時(shí)，與對(duì)照組相比，中藥組IL-17/TGF-β比值降低;與中藥組相比，16、20周齡中藥+VIP受體拮抗劑組小鼠IL-17/TGF-β比值無(wú)明顯變化，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2.脾臟中Th1、2、17及Treg細(xì)胞占比:小鼠16周齡時(shí)，與基線組相比，Th1/Th2比值明顯升高的，且P＜0.05;與對(duì)照組相比

6、，中藥組Th1/Th2比值明顯下降(P＜0.05);與中藥組相比，中藥+VIP受體拮抗組小鼠Th1/Th2比值明顯升高(P＜0.01)。在小鼠16、20周齡時(shí)，與基線組相比，Th17/Treg比值呈逐漸升高的趨勢(shì)（P＜0.05或P＜0.01）;16周齡，與對(duì)照組相比，VIP拮抗劑組小鼠Th17/Treg比值升高(P＜0.01)，而中藥組無(wú)明顯變化;20周齡時(shí)，各組小鼠脾臟中Th1/Th2、Th17/Treg比值無(wú)明顯變化，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

7、但小鼠16、20周齡時(shí)，與對(duì)照組相比，中藥組脾臟中Th17占比明顯升高，而Treg占比下降（P＜0.05或P＜0.01）。
　　3.頜下腺VIP mRNA水平:與基線組相比，在小鼠16、20周齡時(shí)，頜下腺VIP mRNA呈逐漸降低的趨勢(shì)(P＜0.05或P＜0.01);16周齡時(shí)，與對(duì)照組，中藥組相比VIP mRNA明顯增加(P＜0.01)，VIP拮抗劑組無(wú)明顯變化;20周齡時(shí)，各組小鼠頜下腺VIP mRNA均無(wú)明顯變化，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意

8、義。
　　4.頜下腺病理評(píng)分:與基線組相比，在小鼠16、20周齡時(shí)，頜下腺病理評(píng)分呈逐漸升高的趨勢(shì)(P＜0.05);小鼠16、20周齡時(shí)，中藥組小鼠頜下腺病理評(píng)分均明顯低于對(duì)照組（P＜0.05或P＜0.01）。
　　結(jié)論:
　　“肺腸合治法”中藥方（麥冬地芍湯）能夠發(fā)揮頜下腺保護(hù)作用，正向調(diào)節(jié)頜下腺VIPmRNA水平，中藥方（麥冬地芍湯）是通過(guò)VIP途徑發(fā)揮作用，以改善機(jī)體血清及脾臟中Th1/Th2、Th17/Treg