2 型糖尿病脂聯(lián)素表達(dá)水平與乳腺癌發(fā)生的相關(guān)性研究.pdf

1、第一部分：糖尿病大鼠脂聯(lián)素表達(dá)水平的變化及西格列汀干預(yù)研究
　　背景：脂聯(lián)素（Adiponection）是主要由脂肪組織分泌的一種細(xì)胞因子，參與調(diào)節(jié)糖脂代謝，改善胰島素抵抗(IR)，脂聯(lián)素水平的下降可加重胰島素抵抗，從而導(dǎo)致相關(guān)的疾病如代謝綜合征、2型糖尿病、非酒精性脂肪肝的發(fā)生發(fā)展[1]。西格列汀作為二肽基肽酶-4(DPP-IV)抑制劑之一，刺激胰島β細(xì)胞產(chǎn)生和分泌胰島素，改善胰島β細(xì)胞對(duì)葡萄糖的反應(yīng)性，抑制胰島α細(xì)胞分泌胰高糖

2、素，抑制內(nèi)源性葡萄糖的生成，綜合作用從而降低血糖。
　　目的：了解肥胖糖尿病大鼠血清脂聯(lián)素水平及腎周脂肪、骨骼肌、肝臟組織脂聯(lián)素表達(dá)水平，并觀察西格列汀干預(yù)對(duì)糖尿病大鼠糖脂代謝的影響及脂聯(lián)素在三種組織中表達(dá)的變化。
　　方法：將60只普通級(jí)雄性SD大鼠隨機(jī)分為高脂飲食喂養(yǎng)組(HD組，n=45)和普通飼料喂養(yǎng)組(NC組，n=15)。12周后，經(jīng)高脂飲食喂養(yǎng)成功建立肥胖模型(n=35)，隨機(jī)留取肥胖對(duì)照組(OB組，n=8)。其余

3、肥胖大鼠腹腔注射鏈脲佐菌素（STZ）35 mg/kg。肥胖DM大鼠造模成功(n=20)后，再隨機(jī)分為2組：DM對(duì)照組（DM組，n=10），西格列汀干預(yù)組（SP組，n=10）。采用ELISA法分別測(cè)定干預(yù)前后各組大鼠血清脂聯(lián)素水平和體質(zhì)量(BW)、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、空腹血糖(FBG)、空腹胰島素(FINS)，再計(jì)算胰島素敏感指數(shù)（HOMA-β）及胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)，采用 W

4、estern blot法檢測(cè)NC組、DM組和SP組的大鼠骨骼肌、腎周脂肪、和肝臟脂聯(lián)素蛋白表達(dá)水平。
　　1.成功建立肥胖大鼠模型和肥胖糖尿病大鼠模型。
　　2.各組生化指標(biāo)比較:
　?、盼鞲窳型「深A(yù)前，與NC組相比，OB組BW、FINS、HOMA-IR、 LDL-C均升高，HOMA-β降低(均P<0.05)，但FBG、TG、TC無(wú)明顯升高(P＞0.05)；DM組和SP組BW、FBG、FINS、HOMA-IR、TG、T

5、C、LDL-C、FINS均升高，HOMA-β降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。與OB組相比，DM組和SP組的FBG、HOMA-IR、TG升高(均P<0.05)；但DM組和SP組兩組之間上述指標(biāo)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　?、铺悄虿〈笫蠼o予西格列汀干預(yù)后，與NC組相比，SP組大鼠FBG、FINS升高，HOMA-β下降，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(均P<0.05)。與DM組相比，SP組大鼠的FBG、TG、LDL-C、FINS、HO

6、MA-IR下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)，HOMA-β輕度升高，BW有下降趨勢(shì)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。與OB組相比，SP組BW、FINS、HOMA-IR下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。
　　3．血清脂聯(lián)素水平的變化
　?、盼鞲窳型「深A(yù)前，與NC組相比，DM組、SP組和OB組脂聯(lián)素水平均下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)，但DM組和SP組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；
　?、?/p>

7、西格列汀干預(yù)后，SP組的脂聯(lián)素水平上升，與DM對(duì)照組和OB組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(均P<0.05)，與NC組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)；OB組的脂聯(lián)素水平與NC組和SP組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(均P<0.05)，與DM組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。
　　4.組織脂聯(lián)素表達(dá)水平的變化：與NC組相比，DM組與SP組大鼠腎周脂肪、肝臟組織、肌肉組織脂聯(lián)素的表達(dá)量減少（均P<0.05）；與DM組相比，SP組大鼠肝臟組織、肌肉組織的脂聯(lián)素蛋白表達(dá)

8、量增加（均P<0.05），腎周脂肪組織脂聯(lián)素蛋白表達(dá)量有下降趨勢(shì)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　5.相關(guān)性分析顯示西格列汀干預(yù)后脂聯(lián)素與BW、TG、TC、LDL-C、FBG、FINS及HOMO-IR、HOMA-β始終獨(dú)立相關(guān)（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　肥胖大鼠及肥胖糖尿病大鼠血清脂聯(lián)素水平降低，腎周、肝臟及肌肉組織脂聯(lián)素蛋白表達(dá)水平下降。西格列汀干預(yù)可改善糖尿病大鼠的糖脂代謝，升高血清脂聯(lián)素水平，且

9、提高肌肉及肝臟組織中脂聯(lián)素蛋白表達(dá)水平。
　　第二部分：脂聯(lián)素在2型糖尿病乳腺癌發(fā)病機(jī)制中可能作用
　　背景：
　　眾多研究表明，在糖尿病女性人群中乳腺癌患病率明顯增加，特別是在肥胖患者中。其確切機(jī)制尚不明確，近年來(lái)的多項(xiàng)研究表明脂肪因子表達(dá)分泌異常起重要作用。脂聯(lián)素是一種重要的脂肪因子，目前認(rèn)為脂聯(lián)素與乳腺癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。本研究擬通過(guò)收集2型糖尿病伴乳腺癌和非糖尿病乳腺癌患者的血清和乳腺癌組織、癌旁組織標(biāo)本及相

10、關(guān)臨床資料，觀察正常血糖和糖尿病患者乳腺癌組織細(xì)胞周期相關(guān)指標(biāo)晚期糖基化終末產(chǎn)物受體（RAGE）、G1/S特異性周期蛋白-D1(Cyclin D1)和核轉(zhuǎn)錄因子（NF-κB）表達(dá)的差異，分析脂聯(lián)素與它們表達(dá)的相關(guān)性，探討脂聯(lián)素參與2型糖尿病乳腺癌發(fā)病的可能機(jī)制。
　　目的：
　　了解2型糖尿病伴乳腺癌與非糖尿病乳腺癌患者血清脂聯(lián)素水平的差異；兩組患者癌組織、癌旁組織脂聯(lián)素、RAGE、Cyclin D1和NF-κB表達(dá)的差異，

11、分析脂聯(lián)素與三種指標(biāo)表達(dá)的相關(guān)性，探討脂聯(lián)素參與2型糖尿病患者乳腺癌發(fā)生的可能途徑及機(jī)制，從而為降低2型糖尿病患乳腺癌風(fēng)險(xiǎn)及治療提供依據(jù)。
　　方法：
　　1.納入20例2型糖尿病伴乳腺癌患者和30例非糖尿病乳腺癌患者，采集臨床資料，抽取靜脈血5ml，檢測(cè)空腹血糖(FBG)、空腹胰島素(FINS)、血清膽固醇（TC）、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、總脂聯(lián)素(Adipon

12、ectin)、高分子量脂聯(lián)素水平(HMW adiponectin)，并計(jì)算HOMA-IR。
　　2.2組患者手術(shù)時(shí)，切取適量癌組織及癌旁3cm以外的正常乳腺組織；合并糖尿病的乳腺癌患者癌組織歸為DBCC組，正常乳腺組織為DBCN組，單純?nèi)橄侔┗颊叩陌┙M織為 BCC組，正常乳腺組織為 BCN組。采用 Western Blot和qRT-PCR檢測(cè)脂聯(lián)素、RAGE、Cyclin D1和NF-κB蛋白和mRNA表達(dá)水平。
　　結(jié)果：

13、
　　1.兩組患者一般情況與腫瘤分期的比較：兩組研究對(duì)象之間年齡、體重指數(shù)均無(wú)明顯差異（P>0.05），但合并糖尿病組患者年齡偏大；兩組研究對(duì)象之間腫瘤大小存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05），合并糖尿病的乳腺癌患者腫瘤大小的分期級(jí)別更高；但是兩組之間腫瘤淋巴轉(zhuǎn)移情況及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移情況無(wú)明顯差異（P>0.05）。2.兩組患者之間血清學(xué)指標(biāo)的比較：兩組研究對(duì)象之間血清TG水平、HOMA-IR存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05），合并糖尿病的乳腺癌患

14、者血清TG水平及HOMA-IR更高；兩組之間比較，合并糖尿病的乳腺癌患者血清HDL水平、血清脂聯(lián)素水平及血清高分子量脂聯(lián)素水平較低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；兩組研究對(duì)象血清TC水平與血清LDL水平無(wú)明顯差異（P>0.05）。
　　3.相關(guān)性分析：pearson相關(guān)分析顯示血清總脂聯(lián)素水平與血清高分子量脂聯(lián)素水平均與BMI及HDL水平無(wú)相關(guān)性（P>0.05），與HOMA-IR呈負(fù)相關(guān)（P<0.05），與血清TG水平呈正相

15、關(guān)（P<0.05）；spearman相關(guān)分析顯示血清總脂聯(lián)素水平、血清高分子量脂聯(lián)素水平均與腫瘤大小呈負(fù)相關(guān)（P<0.05）。
　　4.組織學(xué)指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果：免疫組化及Western blot技術(shù)用于四組不同組織RAGE蛋白表達(dá)量的檢測(cè)，結(jié)果顯示DBCC組RAGE蛋白表達(dá)量高于BCC組及DBCN組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；BCN組RAGE蛋白表達(dá)量明顯低于DBCN及BCC組
　　(P<0.05)。Western b

16、lot和qPCR技術(shù)用于四組不同組織蛋白NF-κB和 CyclinD1蛋白及mRNA表達(dá)量的檢測(cè)，結(jié)果顯示DBCC組NF-κB和CyclinD1蛋白及mRNA表達(dá)量均高于BCC組和DBCN組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，DBCN組與BCN組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；脂聯(lián)素蛋白和mRNA表達(dá)量在DBCC組顯著降低于DBCN、BCC和BCN組(P<0.05)。
　　5.組織學(xué)指標(biāo)RAGE、NF-κB及cyclinD

17、1蛋白表達(dá)量線性相關(guān)分析：cyclinD1的表達(dá)量與RAGE表達(dá)量呈正相關(guān)(R=0.931, P<0.001)，但NF-κB的表達(dá)量與RAGE表達(dá)量之間無(wú)明顯相關(guān)關(guān)系（P>0.05）。
　　6.血清總脂聯(lián)素、高分子量脂聯(lián)素與組織學(xué)指標(biāo)的相關(guān)性分析：pearson相關(guān)分析顯示血清總脂聯(lián)素水平與RAGE、Cyclin D1、NF-κB表達(dá)水平顯著負(fù)相關(guān)（P<0.05），血清高分子量脂聯(lián)素水平與RAGE、NF-κB表達(dá)水平顯著負(fù)相關(guān)（P

18、<0.05），與Cyclin D1表達(dá)水平無(wú)明顯相關(guān)（P>0.05）。
　　7.乳腺癌組織脂聯(lián)素表達(dá)與RAGE、NF-κB及cyclinD1表達(dá)量相關(guān)分析：腫瘤組織脂聯(lián)素表達(dá)量與RAGE、CyclinD1及NF-κB表達(dá)均呈負(fù)相關(guān)（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.合并糖尿病的乳腺癌患者腫瘤大小的分期級(jí)別更高。
　　2.合并糖尿病的乳腺癌患者血清HDL-C水平、血清總脂聯(lián)素水平及血清高分子量脂聯(lián)素水平降低，提

19、示脂聯(lián)素可能是糖尿病患者乳腺癌發(fā)生的保護(hù)因素。
　　3.糖尿病伴乳腺癌患者 RAGE、Cyclin D1、NF-κB表達(dá)明顯增高,脂聯(lián)素的表達(dá)下降，提示細(xì)胞增殖周期的異常參與乳腺癌的發(fā)生發(fā)展，而脂聯(lián)素參與調(diào)控細(xì)胞增殖周期。
　　4.血清總脂聯(lián)素、高分子量脂聯(lián)素水平與 RAGE、NF-κB表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，組織脂聯(lián)素表達(dá)與RAGE、NF-κB和Cyclin D1表達(dá)負(fù)相關(guān)，提示脂聯(lián)素可能通過(guò)調(diào)節(jié)RAGE-NF-κB信號(hào)通路調(diào)控糖尿