多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌碳青霉烯酶基因檢測(cè)和多位點(diǎn)序列分型.pdf

1、目的：
　　鮑曼不動(dòng)桿菌是一種革蘭陰性桿菌非發(fā)酵菌，屬于條件致病菌。其廣泛分布于醫(yī)院環(huán)境、水、土壤以及人體皮膚表面，為醫(yī)院感染的重要條件致病菌之一，極易引起敗血癥、心內(nèi)膜炎、繼發(fā)性腦膜炎、獲得性肺炎、創(chuàng)口感染和尿路感染等在內(nèi)的多種院內(nèi)感染。隨著臨床廣譜坑生素和免疫抑制劑的應(yīng)用，大量出現(xiàn)了對(duì)碳青霉烯類、頭孢菌素類、β-內(nèi)酰胺類、氨基糖苷類和氟喹諾酮類3種及以上抗生素同時(shí)耐藥的鮑曼不動(dòng)桿菌，多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌在臨床上的分離率越來(lái)越高

2、，在醫(yī)院內(nèi)廣泛流行，給臨床工作者預(yù)防感染及治療帶來(lái)巨大的挑戰(zhàn)。檢測(cè)多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)臨床常見(jiàn)抗菌藥物的敏感性并測(cè)定其耐藥基因，分析菌株間親緣進(jìn)化關(guān)系，對(duì)菌株進(jìn)行同源性的研究顯得尤為重要。其能夠?yàn)榕R床醫(yī)生合理使用抗生素，為預(yù)防和控制多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌引起的院內(nèi)感染和暴發(fā)流行提供一定的理論依據(jù)，給多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌的分子流行病學(xué)調(diào)查和研究奠定實(shí)驗(yàn)室基礎(chǔ)。
　　方法：
　　收集本實(shí)驗(yàn)室2015年從安徽地區(qū)34家醫(yī)院臨床分離

3、而來(lái)的多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌87株。首先采用瓊脂二倍稀釋法測(cè)定其對(duì)臨床11種常用抗生素的敏感性，用 PCR方法檢測(cè)多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌攜帶的碳青霉稀類主要的相關(guān)耐藥基因，OXA-23、OXA-51、OXA-24、OXA-58型等；然后應(yīng)用多位點(diǎn)序列分型（MLST）方法分析87株臨床分離的多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌同源性，獲得每個(gè)菌株的等位基因譜（allelic profile）和其所對(duì)應(yīng)的序列型(sequence type,ST)。在菌株等位基

4、因譜和 ST型已知的基礎(chǔ)上使用 Bionumerics軟件構(gòu)建最小生成樹圖和聚類圖，eBURST軟件分析確定其所屬于的克隆復(fù)合體（clone complex）。
　　結(jié)果：
　　87株多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌美羅培南、亞胺培南的耐藥率分別為66.7%，74.7%。68株菌對(duì)慶大霉素耐藥，62株對(duì)哌拉西林/他唑巴坦耐藥，47株對(duì)左氧氟沙星耐藥，60株對(duì)頭孢曲松耐藥，對(duì)其他抗菌藥物均顯示出較高的耐藥率。PCR實(shí)驗(yàn)中87株多重耐藥鮑曼

5、不動(dòng)桿菌oxa-51基因攜帶率為100%，攜帶oxa-23基因的鮑曼不動(dòng)桿菌有82株，占94.3%，沒(méi)有發(fā)現(xiàn)攜帶oxa-58、oxa-24基因的多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌。MLST實(shí)驗(yàn)中87株鮑曼不動(dòng)桿菌分為42個(gè)ST型，其中6個(gè)型別是數(shù)據(jù)庫(kù)里原來(lái)有的，36個(gè)型別為新的型別（暫時(shí)命名為STnew01-STnew36）。本地區(qū)2015年87株多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌主要的流行克隆株等位基因譜為 ST2（2-2-2-2-2-2-2），包含37株菌，占

6、42.5%，是優(yōu)勢(shì)型別，與世界上很多國(guó)家的多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌主要流行克隆株 ST型具有高度的同源性；其余41個(gè)型別分別包含1-4株菌。其中35個(gè)型別只包含1株菌，即有35株菌具有獨(dú)特的ST型。應(yīng)用eBURST軟件分析巴斯德研究所網(wǎng)站上所有鮑曼不動(dòng)桿菌等位基因譜，確定本實(shí)驗(yàn)中 ST2型鮑曼不動(dòng)桿菌屬于克隆復(fù)合體 CC1。ST型為 STnew05、STnew01、STnew29、STnew06、STnew04、STnew28、STnew2

7、1、ST724、ST570與ST2型鮑曼不動(dòng)桿菌只具有一個(gè)等位基因上的差別，因此也都屬于克隆群CC1。而本實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的一株ST105型的鮑曼不動(dòng)桿菌屬于CC4，ST63屬于CC6，ST235則屬于獨(dú)立的ST型。36株新的 ST型菌株等位基因譜分別是 STnew01(2-2-2-2-2-2-49)、STnew02(13-4-40-1-42-1-1)、STnew03(1-3-2-1-3-1-46)、STnew04(2-2-2-2-2-2-4

8、4)、STnew05(2-2-2-2-2-2-20)、STnew06(2-2-2-2-2-2-2-97)、STnew07(13-4-40-1-42-1-98)、STnew08(13-4-40-1-42-1-2)、STnew09(3-2-5-1-3-1-2)、STnew10(2-2-2-2-3-1-2)、STnew11(13-4-2-3-6-1-2)、STnew12(8-5-5-1-7-1-2)、STnew13（3-4-4-2-9-1-2

9、）、STnew14(3-1-2-1-18-1-2)、STnew15(3-1-7-1-7-2-2)、STnew16(17-20-23-10-20-13-2)、STnew17(20-26-26-14-26-16-2)、STnew18(23-20-28-10-25-18-2)、STnew19(45-20-44-67-25-29-2)、STnew20(27-2-110-57-121-56-2)、STnew21(2-2-2-2-2-2-3)、ST

10、new22(1-3-40-2-7-1-4)、STnew23(3-1-2-2-3-2-4)、STnew24(3-5-5-1-7-1-26)、STnew25(1-4-2-2-7-1-29)、STnew26(22-26-90-14-23-16-48)、STnew27(3-3-3-4-7-4-49)、STnew28(2-2-2-2-2-2-51)、STnew29(2-2-2-2-2-2-63)、STnew30(97-2-13-2-3-2-2)、

11、STnew31(97-2-13-2-3-2-2)、STnew32(3-2-2-2-2-2-5)、STnew33(1-4-2-2-7-1-2)、STnew34(22-26-90-14-23-16-2)、STnew35(3-2-2-2-3-4-2)、STnew36(3-3-2-5-7-2-44)。
　　結(jié)論：
　　多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)11種常見(jiàn)臨床抗菌藥物均呈現(xiàn)出較高的耐藥率，87株多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌均攜帶OXA-51基因，