中國(guó)碳青霉烯耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌多位點(diǎn)序列分型及OXA酶分布研究.pdf

1、碳青霉烯類（Carbapenem）抗生素是治療由鮑曼不動(dòng)桿菌（Acinetobacterbaumannii）引發(fā)感染最重要的β-內(nèi)酰胺類（β-lactam）抗生素之一。而碳青霉烯類抗生素耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌在我國(guó)各地的廣泛流行，給臨床治療與抗生素的選擇帶來極大的困難。為了制定科學(xué)、有效的防控措施，通常采用各種分子分型方法，對(duì)其進(jìn)行分子流行病學(xué)研究并明確流行趨勢(shì)，為進(jìn)一步探究鮑曼不動(dòng)桿菌的耐藥機(jī)制提供基礎(chǔ)。
　　 本研究于2009年1

2、月至2010年12月期間在全國(guó)23個(gè)省市的64家醫(yī)院收集2197株非重復(fù)的鮑曼不動(dòng)桿菌，并選擇12種常見抗菌藥物開展體外藥物敏感性試驗(yàn)。根據(jù)藥敏結(jié)果，對(duì)篩選出的808株碳青霉烯耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌應(yīng)用多位點(diǎn)序列分型(Multilocus sequence typing，MLST)方法進(jìn)行分子流行病學(xué)研究;借助Linux服務(wù)器、DNA序列拼接與比對(duì)工具編寫Perl腳本，實(shí)現(xiàn)對(duì)各等位基因測(cè)序數(shù)據(jù)的批量處理，并鑒定出等位基因型(Allele ty

3、pe)與序列型(Sequence type，ST);應(yīng)用eBURST軟件與Bionumerics軟件對(duì)MLST數(shù)據(jù)進(jìn)行聚類分析，預(yù)測(cè)各菌株間的進(jìn)化關(guān)系。
　　 體外藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果顯示，所有鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)12種臨床常用抗生素的平均耐藥率為50％～60％，而米諾環(huán)素僅有11.56％。MLST結(jié)果顯示，碳青霉烯耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌的遺傳背景相對(duì)單一，共分為40個(gè)ST型（包括17個(gè)已被PubMLST數(shù)據(jù)庫(kù)收錄及23個(gè)新發(fā)現(xiàn)的ST型），其

4、中ST92及其單位點(diǎn)變異型（Single locus variant，SLV）ST138、ST75與ST381為最主要流行的ST型。應(yīng)用eBURST軟件與Bionumerics軟件分析MLST數(shù)據(jù)，發(fā)現(xiàn)當(dāng)前中國(guó)最廣泛流行的鮑曼不動(dòng)桿菌克隆復(fù)合體(Clonal complex，CC)為CC92，該克隆復(fù)合體包括ST92、ST138、ST75等ST型。本研究中的體外藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果也表明，屬于CC92的菌株較其他ST型菌株具有更高的耐藥率

5、。
　　 上述研究結(jié)果表明，CC92是鮑曼不動(dòng)桿菌流行最廣的克隆復(fù)合體，它在我國(guó)分布廣泛且傳播迅速，常伴隨多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌的播散與流行。因此，CC92在我國(guó)的大范圍流行是導(dǎo)致鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)多種抗菌藥物耐藥率迅速上升的重要原因。
　　 具有碳青霉烯類抗生素水解能力的D類β-內(nèi)酰胺酶（Carbapenem-hydrolyzingclass Dβ-lactamases，CHDLs）是不動(dòng)桿菌（Acinetobacter s

6、pp.）最常見的碳青霉烯酶，帶介導(dǎo)其對(duì)碳青霉烯類抗生素耐藥。本研究主要應(yīng)用分子生物學(xué)手段，探討5種常見編碼CHDLs的OXA耐藥基因在不動(dòng)桿菌中的分布與耐藥表型、傳播機(jī)制之間的關(guān)系。
　　 本研究對(duì)收集于2009年1月至2010年12月期間全國(guó)23個(gè)省市64家醫(yī)院分離的2880株不動(dòng)桿菌開展體外藥物敏感性試驗(yàn)，測(cè)定其對(duì)12種抗菌藥物的最小抑菌濃度（minimum inhibitory concentration，MIC）;并應(yīng)用

7、PCR擴(kuò)增與測(cè)序技術(shù)，對(duì)篩選出攜帶blaoxA-51-like、blaoxA-23-like、blaoxA-24-like、blaoxA-58-like與blaoxA-143-like基因的不動(dòng)桿菌進(jìn)行菌種鑒定;應(yīng)用脈沖場(chǎng)凝膠電泳(Pulsed-field gelelectrophoresis，PFGE)與Southern雜交確定OXA基因的定位;應(yīng)用質(zhì)粒抽提與電轉(zhuǎn)化確定攜帶OXA基因質(zhì)粒的可傳播性。
　　 體外藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)

8、果顯示，不動(dòng)桿菌對(duì)碳青霉烯類抗生素的耐藥率約為50％。多重PCR結(jié)果顯示，攜帶blaoxA-51-like基因與blaoxA-23-like基因的不動(dòng)桿菌分別占76.3％與45.7％。而44.9％的不動(dòng)桿菌同時(shí)攜帶blaoxA-51-like基因與blaoxA-23-like基因，高達(dá)95％攜帶blaoxA-23-like基因的不動(dòng)桿菌對(duì)碳青霉烯類抗生素耐藥。此外，篩查發(fā)現(xiàn)攜帶blaoxA-24-like基因、blaoxA-58-lik