細(xì)胞增殖相關(guān)基因NYD-SP15在人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞中的表達(dá)定位與功能研究.pdf

1、目的：研究細(xì)胞增殖相關(guān)基因NYD-SP15在人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞ARPE19中的表達(dá)及對(duì)ARPE19細(xì)胞增殖的影響，以進(jìn)一步探討NYD-SP15在增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變(PVR)發(fā)生和發(fā)展過程中的作用機(jī)制。 方法：采用基因重組技術(shù)構(gòu)建熒光表達(dá)載體pEGFP-C1-NYD-SP15和真核表達(dá)載體pcDNA3.1-myc-NYD-SP15，質(zhì)粒經(jīng)PcR和測(cè)序分析鑒定后，用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法轉(zhuǎn)染ARPE19細(xì)胞，觀察GFP-NYD-SP15

2、融合蛋白在ARPE19細(xì)胞的表達(dá)定位，流式細(xì)胞儀測(cè)定NYD-SP15轉(zhuǎn)染后對(duì)ARPE19細(xì)胞生長(zhǎng)周期、凋亡的影響。 研究結(jié)果表明：經(jīng)PCR和測(cè)序分析鑒定，成功地構(gòu)建了熒光表達(dá)載體pEGFP-C1-NYD-SP15和真核表達(dá)載體pcDNA3.1-myc-NYD-SP15。GFP-NYD-SP15融合蛋白亞細(xì)胞定位顯示，NYD-SP15低表達(dá)于ARPE19細(xì)胞胞漿，高表達(dá)于細(xì)胞核；pcDNA3.1-myc-NYD-SP15瞬時(shí)轉(zhuǎn)染A

3、RPE19細(xì)胞顯示24小時(shí)細(xì)胞無明顯改變，48小時(shí)后重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組S期細(xì)胞占細(xì)胞總數(shù)的19.37％，pcDNA3.1-myc空載質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組S期細(xì)胞占10.87％，而空白對(duì)照組S期細(xì)胞占3.33％，重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組與兩對(duì)照組之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。 結(jié)論：生物信息學(xué)分析顯示NYD-SP15蛋白是胞苷脫氨酶家族的成員之一，與人的其它脫氨酶不同，它具有兩個(gè)dCMP_cyt_deam結(jié)構(gòu)域。進(jìn)化分析顯示，N端的結(jié)構(gòu)域起源于

4、胞苷脫氨酶(CDA)，C端的結(jié)構(gòu)域起源于脫氧胞苷酸脫氨酶(dCMP)。因此，NYD-SP15具有脫氨酶相關(guān)蛋白的功能。流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示NYD-SP15能夠促使ARPE19細(xì)胞從G1期進(jìn)入S期，促進(jìn)DNA的合成，進(jìn)而促進(jìn)ARPE19細(xì)胞的增殖，這一結(jié)果與其結(jié)構(gòu)功能域dCMP_cyt deam的功能是相一致的。提示NYD-SP15在增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變(PVR)發(fā)生和發(fā)展過程中可促進(jìn)DNA的合成，引起細(xì)胞增生。本研究為該基因的功能研