亞硝酸鹽對(duì)人肝癌SMMC-7721細(xì)胞干細(xì)胞樣表型特征的影響.pdf

1、背景:在大多數(shù)人的認(rèn)識(shí)中，亞硝酸鹽是導(dǎo)致腫瘤發(fā)生的“罪魁禍?zhǔn)住?，認(rèn)為亞硝酸鹽有很強(qiáng)的致癌作用；而國(guó)外許多研究表明，亞硝酸鹽對(duì)心血管疾病有很好的保護(hù)作用。近年來(lái)，隨著研究者對(duì)腫瘤領(lǐng)域研究的不斷深入，有許多的證據(jù)表明原發(fā)或轉(zhuǎn)移灶腫瘤組織或細(xì)胞中存在著數(shù)量不等的類(lèi)似于普通干細(xì)胞的腫瘤干細(xì)胞（cancer stem cells,CSCs）亞群。然而，腫瘤干細(xì)胞究竟是如何被調(diào)控的還不清楚。大量研究表明腫瘤微環(huán)境中的一些生物介質(zhì)可以導(dǎo)致普通的腫瘤細(xì)

2、胞和腫瘤干細(xì)胞之間發(fā)生可逆性改變，從而使腫瘤細(xì)胞的惡性度發(fā)生改變或者發(fā)生多重耐藥。而在這些生物介質(zhì)中，就有亞硝酸鹽的存在，基于這樣的爭(zhēng)議，所以研究亞硝酸鹽如何調(diào)控腫瘤細(xì)胞的“干性”就顯得尤為重要。
　　目的:本文旨在探討，在腫瘤微環(huán)境中有較高含量，又是細(xì)胞關(guān)鍵的調(diào)控因子的亞硝酸鹽是如何影響人肝癌中腫瘤干細(xì)胞樣細(xì)胞表型的。
　　方法:采用DMEM/F12無(wú)血清培養(yǎng)基和超低吸附6孔板，在懸浮的情況下培養(yǎng)人肝癌SMMC-7721細(xì)

3、胞，懸浮培養(yǎng)所獲得球形成細(xì)胞用于后續(xù)的實(shí)驗(yàn)；流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組細(xì)胞的細(xì)胞周期分布情況，Hoechst33342染料孵育各組細(xì)胞，再用流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組細(xì)胞的邊緣群細(xì)胞數(shù)量；腫瘤細(xì)胞自我更新能力的檢測(cè)采用體外克隆形成實(shí)驗(yàn)和超低吸附6孔板細(xì)胞球形成實(shí)驗(yàn)；各組不同處理?xiàng)l件的肝癌細(xì)胞侵襲能力的檢測(cè)采用Transwell細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)；各組不同處理?xiàng)l件的肝癌細(xì)胞的腫瘤干細(xì)胞表面標(biāo)志物的表達(dá)差異采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)，westen blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果用于檢

4、測(cè)各組不同處理?xiàng)l件的肝癌細(xì)胞的腫瘤干細(xì)胞表面標(biāo)志物蛋白的表達(dá)量；各組不同處理的肝癌細(xì)胞耐藥性采用MTT法檢測(cè)各組細(xì)胞的活力。
　　結(jié)果:肝癌SMMC-7721細(xì)胞通過(guò)懸浮培養(yǎng)所獲得的球形成細(xì)胞自我更新能力增強(qiáng)，在流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志物時(shí)發(fā)現(xiàn)經(jīng)過(guò)亞硝酸鈉處理的細(xì)胞比未經(jīng)過(guò)處理的細(xì)胞腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志物表達(dá)量增加了，對(duì)化療藥物的耐受能力也明顯增強(qiáng)。這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果都提示：我們所獲得的球形成細(xì)胞可能富集了數(shù)量比親本細(xì)胞多的具有腫瘤干細(xì)胞

5、特征的細(xì)胞。用亞硝酸鈉（16mg·L-1）處理親本細(xì)胞和球形成細(xì)胞后，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示經(jīng)亞硝酸鈉處理的組的G0/G1期細(xì)胞比例增加，S期所占的比例減少；邊緣群細(xì)胞數(shù)量所占的比例增多；腫瘤癌干細(xì)胞標(biāo)志物CD133、CD90和EpCAM的表達(dá)量增加；腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的耐受能力和對(duì)組織的侵襲能力增強(qiáng)。與親本細(xì)胞相比，亞硝酸鹽對(duì)球形成細(xì)胞的上述作用明顯增強(qiáng)。結(jié)果表明，亞硝酸鹽通過(guò)上調(diào)肝癌干細(xì)胞“干性”增強(qiáng)肝癌細(xì)胞侵襲能力。
　　結(jié)