亞硝酸鈉對SMMC-7721細(xì)胞增殖、凋亡、侵襲能力的影響.pdf

1、目的：為了揭示環(huán)境亞硝酸鹽暴露對癌細(xì)胞演進(jìn)的影響，研究亞硝酸鹽對人肝癌細(xì)胞增殖、凋亡和侵襲能力的作用，評價(jià)環(huán)境亞硝酸鹽暴露與肝癌的關(guān)系，為科學(xué)制訂食品、飲水亞硝酸鹽健康標(biāo)準(zhǔn)，提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：用人肝癌SMMC-7721細(xì)胞為模型，以亞硝酸鈉代表亞硝酸鹽，以硝酸鈉為對照，體外細(xì)胞增殖指標(biāo)采用MTT細(xì)胞增殖活性、細(xì)胞計(jì)數(shù)、c-fos早期增殖基因；細(xì)胞凋亡模型采用氯化鎘和乙醇誘導(dǎo)法，細(xì)胞凋亡檢測采用流式細(xì)胞術(shù)FITC-ann

2、exinⅤ/PI雙染法、Hoechst 33258 熒光單染法、Hoechst 33258/PI活細(xì)胞聯(lián)染法；細(xì)胞遷移和侵襲能力判定采用劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)。比色法測定脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物與抗過氧化酶活性；免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測金屬硫蛋白（MT）表達(dá)；Western-blotting檢測細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的變化。
　　 結(jié)果：MTT結(jié)果顯示，亞硝酸鈉濃度低于800 mg·L-1時(shí)，細(xì)胞增殖活力呈非線性濃度依賴增殖關(guān)系，亞

3、硝酸鈉最小促增殖效應(yīng)（超過對照組的11％）濃度為17 mg·L-1。用一氧化氮（NO）特異性清除劑羧基-2-苯-4,4,5,5-四甲基咪唑-1-氧-3-氧化物（c-PTIO）清除NO后，培養(yǎng)體系中的亞硝酸鹽仍表現(xiàn)出一定的促細(xì)胞增殖作用。亞硝酸鈉濃度高于800 mg·L-1時(shí)，呈濃度依賴性增殖抑制。
　　 亞硝酸鈉濃度在17-800 mg·L-1時(shí)早期增殖基因c-fos表達(dá)量和細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果也呈現(xiàn)出非線性濃度依賴增加關(guān)系。用17 m

4、g·L-1亞硝酸鈉建立亞硝酸鹽短暫或慢性預(yù)適應(yīng)細(xì)胞模型，兩種細(xì)胞模型在受到氯化鎘或乙醇作用時(shí)，與單純氯化鎘或乙醇組細(xì)胞相比增殖活力升高，細(xì)胞凋亡減少；同時(shí)細(xì)胞丙二醛（MDA）含量下降，超氧化物歧化酶（SOD）和過氧化氫酶（CAT）活性升高，金屬硫蛋白（MT）表達(dá)增強(qiáng)；Bax、Caspase-9、Caspase-3蛋白表達(dá)量降低，Bcl-2蛋白表達(dá)量升高，細(xì)胞缺氧誘導(dǎo)因子-1（hypoxia-inducible factor，HIF-1α

5、）表達(dá)量升高；低于800 mg·L-1的亞硝酸鈉還可以明顯誘導(dǎo)HIF-1α表達(dá)增強(qiáng)，加入一氧化氮清除劑c-PTIO，細(xì)胞HIF-1α表達(dá)雖有所減少，但在一定濃度范圍內(nèi)，仍然促進(jìn)細(xì)胞HIF-1α表達(dá)增強(qiáng)；17 mg·L-1亞硝酸鈉體外作用人肝癌SMMC-7721細(xì)胞24 h，可以使細(xì)胞劃痕愈合的相對距離增大；亞硝酸鈉孵育細(xì)胞48h后，培養(yǎng)液上清誘導(dǎo)24 h，可以使穿過人工基底膜的細(xì)胞數(shù)增多。
　　 結(jié)論：
　　 1.低劑