鎘誘導(dǎo)大鼠支持細(xì)胞凋亡機(jī)制的研究.pdf

1、鎘作為生物體一種非必需元素，極少量進(jìn)入生物體內(nèi)就會導(dǎo)致包括腎臟，肝臟，肺，胰腺，睪丸，胎盤和骨骼在內(nèi)的各種器官產(chǎn)生不可逆的損傷。鎘會對雄性動物和人產(chǎn)生生殖毒性，致使細(xì)胞發(fā)生凋亡或壞死的情況，睪丸組織又是其作用的靶器官。因此探究鎘誘導(dǎo)大鼠支持細(xì)胞凋亡機(jī)制具有重要的理論和實際意義。
　　本文通過體外培養(yǎng)分離出大鼠睪丸支持細(xì)胞，并用HE、油紅O和Feulgen染色對其進(jìn)行了鑒定，采用MTT法測定了不同濃度鎘對支持細(xì)胞增殖率的影響，檢測了

2、不同濃度鎘對支持細(xì)胞內(nèi)SOD活性和MDA含量的變化，利用透射電鏡觀察了支持細(xì)胞凋亡過程中超微結(jié)構(gòu)的變化情況，利用流式細(xì)胞術(shù)檢測不同濃度鎘對誘導(dǎo)支持細(xì)胞凋亡的情況，應(yīng)用RTFQ-PCR技術(shù)檢測了凋亡相關(guān)基因Bax，Bcl-2，Cyt-C，AIF，Caspase-3和Caspase-9 mRNA在支持細(xì)胞中的表達(dá)情況。
　　體外培養(yǎng)分離的支持細(xì)胞形態(tài)支持細(xì)胞呈橢圓形，并長出多個突起，核仁和胞質(zhì)內(nèi)有顆粒物質(zhì)。支持細(xì)胞經(jīng)HE染色后，呈不規(guī)

3、則形狀或輻射狀，有多個粗大的突起。細(xì)胞核染成深色，細(xì)胞質(zhì)豐富，染成淡紅色；油紅O染色后，細(xì)胞核染成藍(lán)色。細(xì)胞質(zhì)中有許多被染成紅色的大小不一圓形細(xì)胞脂質(zhì)小滴；Feulgen染色后，細(xì)胞質(zhì)未著色，細(xì)胞核淡染為紫紅色，其內(nèi)可見一個至數(shù)個著色較深的紫紅色顆粒即為核仁周圍的衛(wèi)星小體。
　　當(dāng)不同濃度的鎘（0，10，20，40，80μmol/L）刺激睪丸支持細(xì)胞24h后，分別檢測了細(xì)胞生殖率、SOD活性和MDA含量的變化情況。隨著氯化鎘濃度升

4、高，各試驗組的生殖率均降低，氯化鎘對睪丸支持細(xì)胞的生殖率具有劑量-效應(yīng)依賴性，并具有統(tǒng)計學(xué)意義。SOD活性隨著氯化鎘濃度升高呈明顯的現(xiàn)下降趨勢，呈現(xiàn)劑量-效應(yīng)關(guān)系。MDA含量隨著氯化鎘濃度升高呈明顯的上升趨勢，呈現(xiàn)劑量-效應(yīng)關(guān)系。
　　透射電鏡觀察結(jié)果顯示，對照組睪丸支持細(xì)胞細(xì)胞器結(jié)構(gòu)清晰完整，線粒體內(nèi)部的峭清晰可見，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)含有脂質(zhì)小滴，并且有許多脂肪空泡。早期凋亡支持細(xì)胞，線粒體出現(xiàn)腫脹，峭發(fā)生斷裂，核糖體和線粒體聚集減少，但

5、細(xì)胞器大部分結(jié)構(gòu)完整，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)增多。中期凋亡支持細(xì)胞的細(xì)胞核開始分解為多個膜結(jié)構(gòu)完整、染色質(zhì)濃縮邊聚集的致密小體。晚期凋亡支持細(xì)胞產(chǎn)生大量泡狀結(jié)構(gòu)，并與細(xì)胞分離，出現(xiàn)凋亡小體。
　　流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果顯示隨著鎘氯化鎘濃度升高，細(xì)胞凋亡程度逐漸增加。其中10μmol/L氯化鎘攻毒組早期凋亡率為12.76％，與對照組相比差異不顯著；而20，40，80μmol/L氯化鎘攻毒組與對照組差異極顯著，并呈現(xiàn)出濃度-劑量的關(guān)系。80μmol/L氯