鈣信號對鎘誘導(dǎo)河南華溪蟹細(xì)胞凋亡的調(diào)控.pdf

1、本論文以河南華溪蟹(Sinopptamon henanense)為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,選擇五個(gè)時(shí)間(12、24、48、72、96 h)段、三個(gè)鎘濃度(14.5 mg·L-1、29 mg·L-1、58 mg·L-1)組處理。首先研究了鎘對肝胰腺Ca2+-Mg2+/Na+-K+-ATPase活性和組織形態(tài)學(xué)的影響,旨在探討鎘對肝胰腺細(xì)胞的氧化損傷和毒性效應(yīng);采用生理生化、酶學(xué)組織化學(xué)和瓊脂糖凝膠電泳法,分別檢測了肝胰腺細(xì)胞鈣調(diào)素(CaM)含量、鈣AT

2、P酶(Ca2+-ATPase)活性、Caspase-3和Caspase-9活性,以及鎘對肝胰腺細(xì)胞DNA的影響,旨在研究鎘對肝胰腺細(xì)胞鈣穩(wěn)態(tài)和凋亡的影響。在此基礎(chǔ)上,為了探明Ca2+信號是否參與鎘誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡,進(jìn)一步研究了鈣抑制劑(EGTA, LaCL3)預(yù)處理對鎘誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的影響,探索鎘誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡過程中信號傳遞途徑和調(diào)控機(jī)理。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:
　　(1)不同濃度鎘處理引起肝胰腺細(xì)胞Ca2+-Mg2+/ Na+-K+-ATPa

3、se的活性在12 h和24 h顯著升高,之后隨著時(shí)間的推移,酶活性開始下降,說明鎘可對膜蛋白產(chǎn)生氧化損傷。
　　(2)在組織形態(tài)學(xué)上,急性58 mg·L-1鎘處理引起肝胰腺組織出現(xiàn)持續(xù)空泡化,腺體結(jié)構(gòu)消失,大量細(xì)胞從基膜脫落等現(xiàn)象,并且鎘對肝胰腺組織形態(tài)學(xué)損傷具有時(shí)間效應(yīng),隨著時(shí)間的延長損傷加重。
　　(3)58 mg·L-1鎘處理可引起肝胰腺細(xì)胞Caspase-3和Caspase-9的活性升高,并且Caspase-3的活性

4、在48 h出現(xiàn)極顯著升高;瓊脂糖凝膠電泳圖譜顯示,鎘處理48 h和72 h,DNA發(fā)生了降解,有典型的“梯狀”條帶出現(xiàn);當(dāng)時(shí)間延長至96 h, DNA呈彌散的連續(xù)狀分布,細(xì)胞出現(xiàn)了壞死。
　　(4)急性鎘暴露引起肝胰腺細(xì)胞 CaM含量和 Ca2+-ATPase活性顯著升高;用Ca2+抑制劑 EGTA和 LaCl3分別預(yù)處理溪蟹后再鎘處理,鎘誘導(dǎo)的肝胰腺細(xì)胞Caspase-3和Caspase-9活性上升被阻斷。
　　結(jié)論:

5、r>　　(1)鎘暴露對肝胰腺 Ca2+-Mg2+/ Na+-K+-ATPase活性和組織形態(tài)學(xué)產(chǎn)生了明顯的影響,并且具有時(shí)間效應(yīng)相關(guān)性。
　　(2)鎘處理可以引起肝胰腺細(xì)胞Caspase-3和Caspase-9被激活,同時(shí)細(xì)胞DNA出現(xiàn)典型“梯狀”條帶,說明鎘可引發(fā)肝胰腺細(xì)胞凋亡。
　　(3)鎘處理引起肝胰腺細(xì)胞CaM含量和Ca2+-ATPase活性顯著升高,即反映細(xì)胞內(nèi) Ca2+濃度在短時(shí)間內(nèi)發(fā)生劇烈變化([Ca2+]i震