鎘誘導HEK293細胞凋亡機理的研究.pdf

1、鎘可以誘導機體多種組織細胞發(fā)生凋亡。研究鎘誘導的細胞凋亡對于鎘的分子毒理學機制的闡明和鎘所致的損傷與致癌機理的研究具有重要意義。本文對鎘誘導細胞凋亡發(fā)生機制做了如下研究工作： 1 鎘誘導HEK293細胞凋亡采用MTT。法檢測CdCl<,2>的細胞增殖抑制作用；通過倒置顯微鏡、電鏡、瓊脂糖凝膠電泳、流式細胞術(shù)等綜合鑒定CdCl<,2>誘導的細胞凋亡。結(jié)果顯示：CdCl<,2>能顯著地抑制細胞的增殖，并可導致典型的細胞凋亡。但CdC

2、l<,2>誘導的細胞凋亡具有時間和濃度范圍的依賴性，超出這一范圍則主要表現(xiàn)為壞死。 2 鎘誘導HEK293細胞凋亡的線粒體途徑通過激光共聚焦檢測線粒體膜電位，應用Western blot法和熒光免疫法測定Caspase-3酶原、Bcl-2蛋白的變化以及檢測．AIF蛋白在細胞中的定位，應用瓊脂糖凝膠電泳和Western blot法分析Bcl-2的抑制凋亡作用。結(jié)果表明：CdCl<,2>誘導的HEK293細胞凋亡很大程度上是通過作用

3、于線粒體來進行的，線粒體損傷導致細胞色素 c 釋放與AIF轉(zhuǎn)移，從而引發(fā)的Caspases與非Caspases凋亡途徑可能在鎘引發(fā)的細胞凋亡過程中起重要作用，而Bcl-2有一定的抑制凋亡作用。 3 鎘誘導的HEK293細胞凋亡的鈣信號通路以激光共聚焦法檢測細胞胞內(nèi)游離ca<'2+>濃度([Ca<'2+>]<,i>)，應用瓊脂糖凝膠電泳、AO/EB染色和’Western blot法等分析BAPTA-AM的抑制凋亡作用。結(jié)果表明：C

4、dCl<,2>能誘發(fā)HEK293細胞胞內(nèi)游離Ca<'2+>濃度([Ca<'2+>]<,i>)明顯上升，而鈣離子螯合劑，BAPTA-AM對CdCl<,2>誘導的HEK293細胞凋亡有一定的抑制作用，表明鎘引起的胞內(nèi)鈣離子的堆積可能在CdCl<,2>誘導的HEK293細胞凋亡中發(fā)揮著重要作用。而[Ca<,2+>]<,i>的動態(tài)觀測實驗表明CdCl<,2>誘發(fā)的[Ca<'2+>]<,i>明顯上升與胞內(nèi)鈣庫中鈣離子的釋放和胞外鈣離子的內(nèi)流密切相