姜黃素對實驗性非酒精性脂肪肝病PPAR-α啟動子區(qū)的去甲基化作用.pdf

1、本文分析了姜黃素對實驗性非酒精性脂肪肝病PPAR-α啟動子區(qū)的去甲基化作用。本研究分為兩個部分：
　　第一部分：姜黃素對脂肪變性BRL肝細(xì)胞 PPAR-α的去甲基化作用。
　　目的：觀察姜黃素對油酸誘導(dǎo)的大鼠脂肪肝細(xì)胞株(BRL)模型過氧化物酶體增殖物活化受體-α（PPAR-α）啟動子區(qū)的去甲基化作用。
　　方法：用油酸誘導(dǎo)BRL細(xì)胞造模脂肪變細(xì)胞株模型，研究分為正常組，模型組，姜黃素組（濃度為10.0μM）及去甲基化

2、藥物5-Aza-CdR組（5.0μM的5-aza-2'-deoxycytidine），各組給予相應(yīng)處理，48h后檢測上清液ALT、AST、TG、TC及細(xì)胞內(nèi)TG、TC含量，用油紅O染色鏡下觀察細(xì)胞內(nèi)脂肪變程度，RT-PCR檢測PPAR-αmRNA表達(dá)，焦磷酸測序法分析PPAR-α啟動子區(qū)甲基化水平。使用 SPSS13.0統(tǒng)計軟件處理數(shù)據(jù)，所有資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（??±S）表示，多組間比較用 One-Way-ANOVA分析，組間比較使用S

3、tudent-Newman-keuls q檢驗，PPAR-αmRNA與甲基化關(guān)聯(lián)性使用直線相關(guān)分析，P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果：模型組上清液ALT、AST、TG、TC及細(xì)胞內(nèi)TG、TC比正常組顯著升高（P均<0.05），油紅O染色鏡下觀察發(fā)現(xiàn)模型組細(xì)胞內(nèi)脂滴顯著高于正常組，PPAR-αmRNA相對表達(dá)水平顯著下降（P<0.01），-378、-375、-373、-329、-316五個CpG位點的甲基化率顯著升高(P

4、<0.05)。姜黃素干預(yù)后，與模型組相比，ALT、AST、TG、TC濃度及胞內(nèi)TG、TC含量均顯著降低（P均<0.05），油紅O染色鏡下觀察提示細(xì)胞內(nèi)脂滴顯著減少甚至消失， PPAR-αmRNA表達(dá)水平顯著升高(P<0.01)，上述五個CpG位點除-373外甲基化率顯著降低（P均<0.05）。與模型組相比，5-Aza-CdR組PPAR-αmRNA表達(dá)顯著升高（P<0.01），但仍低于正常組（P<0.01），-378、-375、-329、

5、-316四個CpG位點的甲基化率顯著降低（P<0.05）。-378CpG的甲基化率與PPAR-αmRNA表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)（r=-0.66，P<0.05）。
　　結(jié)論：DNA甲基化可能是 NAFLD的發(fā)病機制之一，姜黃素可能通過降低PPAR-α啟動子區(qū) CpG甲基化水平，上調(diào) PPAR-αmRNA表達(dá)，改善大鼠NAFLD細(xì)胞模型的肝脂肪變性。
　　第二部分：姜黃素對非酒精性脂肪肝大鼠模型PPAR-α的去甲基化作用。
　　

6、目的：探討姜黃素對高脂高糖飲食誘導(dǎo)的NAFLD大鼠模型PPAR-α啟動子區(qū)的去甲基化作用。
　　方法：30只SD大鼠隨機分成正常對照組和高脂高糖組，前者普通飼料喂養(yǎng)，后者予以高脂高糖飼料（77.5％普通飼料，10%豬油，10%蔗糖，2%膽固醇，0.3%膽鹽，0.2%丙硫氧嘧啶）喂養(yǎng)。8周后各組處死3只，病理HE染色提示造模成功后，實驗分為正常組（n=7）、模型組（n=7）及姜黃素組（80mg·kg-1·day-1灌胃，n=10），

7、各組給予相應(yīng)處理，5周后處死所有大鼠，檢測血清ALT、TG、TC及肝內(nèi)TG含量，病理HE染色鏡下觀察肝臟脂肪變程度，RT-PCR檢測PPAR-αmRNA表達(dá)，weston blot檢測PPAR-α蛋白質(zhì)表達(dá)水平，焦磷酸測序法分析PPAR-α啟動子區(qū)甲基化水平。使用SPSS13.0統(tǒng)計軟件處理數(shù)據(jù)，所有資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（??±S）表示，多組間比較用One-Way–ANOVA分析，組間比較使用 Student-Newman-keuls q

8、檢驗， PPAR-αmRNA與甲基化關(guān)聯(lián)性使用直線相關(guān)分析，P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果：模型組血清 ALT、TG、TC、空腹血糖、HOMA-IR、肝指數(shù)及肝內(nèi)TG均較正常組顯著升高（P均<0.05），鏡下HE染色表明模型組肝內(nèi)發(fā)生了明顯的脂肪變，肝臟 PPAR-αmRNA及蛋白相對表達(dá)水平均顯著下降（P<0.01），-360、-341、-329、-316、-307五個CpG位點的甲基化率及平均甲基化率均顯著升高(

9、P<0.05)。姜黃素干預(yù)后，與模型組相比，ALT、TG、TC、空腹血糖、HOMA-IR、肝指數(shù)及肝內(nèi) TG均顯著降低（P均<0.05）， HE染色可見肝臟脂肪變顯著緩解，PPAR-αmRNA及蛋白表達(dá)水平顯著升高(P<0.01)，上述五個CpG位點的甲基化率及平均甲基化率均顯著降低（P均<0.05）。-360、-329、-307CpG的甲基化率與PPAR-αmRNA表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)（P<0.05）。
　　結(jié)論：DNA甲基化可能是