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文檔簡介
1、目的:研究小半夏加茯苓醇提物對人肝癌細胞HepG2的增殖抑制作用以及對HepG2凋亡、線粒體跨膜電位、凋亡相關(guān)基因p38、bax、cjun的影響,探討該復(fù)方體外誘導(dǎo)HepG2凋亡的分子機制,為臨床應(yīng)用該復(fù)方輔助治療腫瘤疾病提供理論支撐和實驗依據(jù)。
方法:制備小半夏加茯苓醇提物,運用高效液相色譜法檢測醇提物中6-姜酚和總生物堿的含量;運用倒置相差顯微鏡觀察小半夏加茯苓醇提物對HepG2生長狀態(tài)的影響;運用細胞計數(shù)試劑盒分別檢測9
2、00ug/ml、800ug/ml、700ug/ml、600ug/ml、500ug/ml等不同濃度的小半夏加茯苓醇提物對HepG2的抑制作用,并計算生長抑制率及半數(shù)抑制濃度;運用凋亡雙染法檢測800ug/ml的小半夏加茯苓醇提物對HepG2凋亡的影響;運用羅丹明123檢測800ug/ml的小半夏加茯苓醇提物對HepG2線粒體跨膜電位的影響;運用實時熒光定量PCR檢測800ug/ml的小半夏加茯苓醇提物對HepG2 p38、bax、cjun
3、等凋亡相關(guān)基因的影響。
結(jié)果:
1.高效液相色譜法檢測得出,1mg小半夏加茯苓醇提物含6-姜酚和總生物堿分別為0.75ug和19.74ug。
2.倒置相差顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn),空白對照組細胞形態(tài)飽滿,邊界清晰,胞質(zhì)豐富,胞核呈圓形或橢圓形;實驗組細胞外形不規(guī)則,邊界不清,細胞核濃縮或碎裂,出現(xiàn)較多的懸浮死細胞。
3.細胞計數(shù)試劑盒檢測發(fā)現(xiàn),900ug/ml、800ug/ml、700ug/ml、600ug
4、/ml、500ug/ml的小半夏加茯苓醇提物對HepG2均有顯著的抑制作用;并隨著醇提物濃度的增加,抑制率逐次升高;小半夏加茯苓醇提物作用于HepG2的半數(shù)抑制濃度為(781.70±8.48) ug/ml。
4.凋亡雙染法檢測發(fā)現(xiàn),與同時段的空白對照組相比,實驗組的早期凋亡率和晚期凋亡率均升高。
5.羅丹明123檢測發(fā)現(xiàn),與同時段的空白對照組相比,24h的實驗組熒光強度升高,48h的實驗組熒光強度顯著升高。
5、 6.實時熒光定量PCR檢測發(fā)現(xiàn),與空白對照組相比,實驗組p38基因的相對表達量變化無統(tǒng)計學(xué)差異,bax、cjun基因的相對表達量均顯著升高。
結(jié)論:
1.小半夏加茯苓醇提物對HepG2的增殖有明顯的抑制作用,其抑制率與醇提物濃度呈正相關(guān)。
2.小半夏加茯苓醇提物能夠誘導(dǎo)HepG2凋亡的發(fā)生。
3.小半夏加茯苓醇提物抑制HpeG2增殖并誘導(dǎo)其凋亡的機制可能為,通過增強cjun和bax的表達,使ba
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