microRNA-155在免疫性血小板減少癥發(fā)病機制中的研究.pdf

1、免疫性血小板減少癥(immune thrombocytopenia, ITP)是一種臨床上常見的以出血為特征的自身免疫性疾病，約占出血性疾病的1/3，其臨床特征為外周血血小板減少，皮膚黏膜出現(xiàn)瘀點、瘀斑或有出血傾向。主要由于骨髓巨核細胞數(shù)量或功能的異常所致的血小板生成減少以及體內產(chǎn)生抗血小板自身抗體導致血小板破壞過多所造成。其發(fā)病原因尚不完全清楚，目前研究認為抗體介導的血小板破壞是經(jīng)典ITP發(fā)病機制。近年來研究發(fā)現(xiàn)microRNAs廣泛

2、參與調控固有免疫和適應性免疫細胞的分化發(fā)育與功能發(fā)揮，在 ITP發(fā)病機制中的基因調控作用逐漸受到重視。miR-155（microRNA-155）是參與天然免疫應答和特異性免疫應答的最重要的miRNA，在活化的免疫細胞中表達普遍升高，近年研究表明miR-155是免疫系統(tǒng)最主要的 miRNAs之一。因此，本研究主要通過檢測 ITP患者外周血CD19+B細胞中miR-155的表達與B淋巴細胞功能的相關性，及其在ITP患者B淋巴細胞中的靶基因兩

3、部分進行研究探討。
　　第一部分
　　免疫性血小板減少癥患者microRNA-155的表達與B淋巴細胞功能的研究
　　目的：通過檢測免疫性血小板減少癥（ITP）患者外周血CD19+B細胞中miR-155的表達與外周血B淋巴細胞共刺激分子CD80、CD86及胞內抗體IgG、IgM的表達水平，探討miR-155在ITP發(fā)病機制中的作用。
　　方法：采取免疫磁珠法分離2014年12月至2015年10月天津醫(yī)科大學總醫(yī)院

4、血液科住院的 ITP患者及健康對照者外周血中的 CD19+B細胞，其中初診ITP患者30例、完全緩解ITP患者25例、健康志愿者25例。應用實時熒光定量 PCR檢測三組 CD19+B細胞中 miR-155的表達水平，應用流式細胞術檢測CD19+CD5+B、CD19+CD80+B、CD19+CD86+B及CD19+B細胞內抗體IgG、IgM的表達水平，并分析以上指標與臨床資料的相關性。
　　結果：1、初診組ITP患者CD19+B細胞

5、中miR-155的表達水平（4.57±1.03）顯著高于完全緩解組（0.79±0.13）和健康對照組（1.74±0.32），完全緩解組miR-155的表達水平顯著低于健康對照組（均P＜0.05）；且治療有效組ITP患者初診時miR-155的表達水平（3.85±0.71）低于難治組患者初診時miR-155的表達量（6.67±1.05）（P＜0.05）。2、初診組ITP患者CD19+CD5+B細胞的表達水平（8.48％±1.42%）顯著高于

6、完全緩解組（2.33%±0.72%）和健康對照組（1.86%±0.41%）（P＜0.05）。3、初診組ITP患者CD19+CD80+B表達水平（31.37%±2.34%）高于完全緩解組（20.80%±2.67%）和健康對照組（15.95%±2.89%）（P＜0.05）。4、初診組ITP患者CD19+B胞內抗體IgG、IgM兩者表達水平分別為（35.20%±6.19%，26.87%±5.01%），顯著高于完全緩解組（7.51%±1.91%

7、，5.93%±2.23%）和健康對照組（8.23%±0.68%，8.21%±1.08%）（均P＜0.05）。5、miR-155與CD19+CD5+B數(shù)量呈正相關（r=0.576，P=0.003），與外周血血小板計數(shù)呈負相關（r=-0.402，P=0.002）；CD19+CD80+B、CD19+IgG+、CD19+IgM+表達水平與血小板計數(shù)均呈負相關（r=-0.424，r=-0.658，r=-0.526）（均P＜0.05）。
　　

8、結論：miR-155在ITP患者外周血B淋巴細胞中異常高表達，使共刺激信號分子CD80、CD86第二信號傳遞功能增強，從而導致B淋巴細胞異?；罨?，進而活化的 CD19+CD5+B淋巴細胞數(shù)量及胞內抗體產(chǎn)生增多，介導免疫系統(tǒng)發(fā)生紊亂，參與ITP的發(fā)病。抑制miR-155的表達將有望成為ITP新的治療靶點。
　　第二部分
　　microRNA-155在免疫性血小板減少癥B淋巴細胞中靶蛋白的研究
　　目的：通過檢測免疫性血小

9、板減少癥B淋巴細胞中負性調控因子含SH2結構的5＇肌醇磷酸酶-1（SH2-containing inositol phosphatase-1, SHIP-1）的表達，分析其表達水平與B淋巴細胞內miR-155及各種臨床指標的相關性，探討SHIP-1在ITP發(fā)病機制中的作用。
　　方法：采取免疫磁珠法分離2014年12月至2015年10月天津醫(yī)科大學總醫(yī)院血液科住院的 ITP患者及健康對照者外周血中的 CD19+B細胞，其中初診IT

10、P患者30例、完全緩解ITP患者25例、健康志愿者25例。應用實時熒光定量PCR檢測三組CD19+B細胞中SHIP-1的基因表達水平，應用western blot檢測SHIP-1的蛋白表達水平，分析以上指標與miR-155及各種臨床指標的相關性。
　　結果：1、初診組ITP患者CD19+B細胞中SHIP-1的基因表達水平（0.78±0.26）顯著低于完全緩解組（1.91±0.53）和健康對照組（1.69±0.44），完全緩解組與健

11、康對照組無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。2、western blot檢測初診組ITP患者SHIP-1蛋白的表達水平比完全緩解組和健康對照組表達降低。3、初診組ITP患者CD19+B細胞中SHIP-1的表達與miR-155的表達水平呈負相關（r=-0.445， P=0.014）。
　　結論：在ITP患者B淋巴細胞內miR-155可能通過沉默B淋巴細胞負性調控因子SHIP-1蛋白的表達來刺激B淋巴細胞受體活化，進而過度激活自身反應性B淋