microRNA-155在免疫性血小板減少癥發(fā)病機(jī)制中的研究.pdf

1、免疫性血小板減少癥(immune thrombocytopenia, ITP)是一種臨床上常見的以出血為特征的自身免疫性疾病，約占出血性疾病的1/3，其臨床特征為外周血血小板減少，皮膚黏膜出現(xiàn)瘀點(diǎn)、瘀斑或有出血傾向。主要由于骨髓巨核細(xì)胞數(shù)量或功能的異常所致的血小板生成減少以及體內(nèi)產(chǎn)生抗血小板自身抗體導(dǎo)致血小板破壞過多所造成。其發(fā)病原因尚不完全清楚，目前研究認(rèn)為抗體介導(dǎo)的血小板破壞是經(jīng)典ITP發(fā)病機(jī)制。近年來研究發(fā)現(xiàn)microRNAs廣泛

2、參與調(diào)控固有免疫和適應(yīng)性免疫細(xì)胞的分化發(fā)育與功能發(fā)揮，在 ITP發(fā)病機(jī)制中的基因調(diào)控作用逐漸受到重視。miR-155（microRNA-155）是參與天然免疫應(yīng)答和特異性免疫應(yīng)答的最重要的miRNA，在活化的免疫細(xì)胞中表達(dá)普遍升高，近年研究表明miR-155是免疫系統(tǒng)最主要的 miRNAs之一。因此，本研究主要通過檢測 ITP患者外周血CD19+B細(xì)胞中miR-155的表達(dá)與B淋巴細(xì)胞功能的相關(guān)性，及其在ITP患者B淋巴細(xì)胞中的靶基因兩

3、部分進(jìn)行研究探討。
　　第一部分
　　免疫性血小板減少癥患者microRNA-155的表達(dá)與B淋巴細(xì)胞功能的研究
　　目的：通過檢測免疫性血小板減少癥（ITP）患者外周血CD19+B細(xì)胞中miR-155的表達(dá)與外周血B淋巴細(xì)胞共刺激分子CD80、CD86及胞內(nèi)抗體IgG、IgM的表達(dá)水平，探討miR-155在ITP發(fā)病機(jī)制中的作用。
　　方法：采取免疫磁珠法分離2014年12月至2015年10月天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院

4、血液科住院的 ITP患者及健康對照者外周血中的 CD19+B細(xì)胞，其中初診ITP患者30例、完全緩解ITP患者25例、健康志愿者25例。應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量 PCR檢測三組 CD19+B細(xì)胞中 miR-155的表達(dá)水平，應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測CD19+CD5+B、CD19+CD80+B、CD19+CD86+B及CD19+B細(xì)胞內(nèi)抗體IgG、IgM的表達(dá)水平，并分析以上指標(biāo)與臨床資料的相關(guān)性。
　　結(jié)果：1、初診組ITP患者CD19+B細(xì)胞

5、中miR-155的表達(dá)水平（4.57±1.03）顯著高于完全緩解組（0.79±0.13）和健康對照組（1.74±0.32），完全緩解組miR-155的表達(dá)水平顯著低于健康對照組（均P＜0.05）；且治療有效組ITP患者初診時(shí)miR-155的表達(dá)水平（3.85±0.71）低于難治組患者初診時(shí)miR-155的表達(dá)量（6.67±1.05）（P＜0.05）。2、初診組ITP患者CD19+CD5+B細(xì)胞的表達(dá)水平（8.48％±1.42%）顯著高于

6、完全緩解組（2.33%±0.72%）和健康對照組（1.86%±0.41%）（P＜0.05）。3、初診組ITP患者CD19+CD80+B表達(dá)水平（31.37%±2.34%）高于完全緩解組（20.80%±2.67%）和健康對照組（15.95%±2.89%）（P＜0.05）。4、初診組ITP患者CD19+B胞內(nèi)抗體IgG、IgM兩者表達(dá)水平分別為（35.20%±6.19%，26.87%±5.01%），顯著高于完全緩解組（7.51%±1.91%

7、，5.93%±2.23%）和健康對照組（8.23%±0.68%，8.21%±1.08%）（均P＜0.05）。5、miR-155與CD19+CD5+B數(shù)量呈正相關(guān)（r=0.576，P=0.003），與外周血血小板計(jì)數(shù)呈負(fù)相關(guān)（r=-0.402，P=0.002）；CD19+CD80+B、CD19+IgG+、CD19+IgM+表達(dá)水平與血小板計(jì)數(shù)均呈負(fù)相關(guān)（r=-0.424，r=-0.658，r=-0.526）（均P＜0.05）。
　　

8、結(jié)論：miR-155在ITP患者外周血B淋巴細(xì)胞中異常高表達(dá)，使共刺激信號分子CD80、CD86第二信號傳遞功能增強(qiáng)，從而導(dǎo)致B淋巴細(xì)胞異常活化，進(jìn)而活化的 CD19+CD5+B淋巴細(xì)胞數(shù)量及胞內(nèi)抗體產(chǎn)生增多，介導(dǎo)免疫系統(tǒng)發(fā)生紊亂，參與ITP的發(fā)病。抑制miR-155的表達(dá)將有望成為ITP新的治療靶點(diǎn)。
　　第二部分
　　microRNA-155在免疫性血小板減少癥B淋巴細(xì)胞中靶蛋白的研究
　　目的：通過檢測免疫性血小

9、板減少癥B淋巴細(xì)胞中負(fù)性調(diào)控因子含SH2結(jié)構(gòu)的5＇肌醇磷酸酶-1（SH2-containing inositol phosphatase-1, SHIP-1）的表達(dá)，分析其表達(dá)水平與B淋巴細(xì)胞內(nèi)miR-155及各種臨床指標(biāo)的相關(guān)性，探討SHIP-1在ITP發(fā)病機(jī)制中的作用。
　　方法：采取免疫磁珠法分離2014年12月至2015年10月天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院血液科住院的 ITP患者及健康對照者外周血中的 CD19+B細(xì)胞，其中初診IT

10、P患者30例、完全緩解ITP患者25例、健康志愿者25例。應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測三組CD19+B細(xì)胞中SHIP-1的基因表達(dá)水平，應(yīng)用western blot檢測SHIP-1的蛋白表達(dá)水平，分析以上指標(biāo)與miR-155及各種臨床指標(biāo)的相關(guān)性。
　　結(jié)果：1、初診組ITP患者CD19+B細(xì)胞中SHIP-1的基因表達(dá)水平（0.78±0.26）顯著低于完全緩解組（1.91±0.53）和健康對照組（1.69±0.44），完全緩解組與健

11、康對照組無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。2、western blot檢測初診組ITP患者SHIP-1蛋白的表達(dá)水平比完全緩解組和健康對照組表達(dá)降低。3、初診組ITP患者CD19+B細(xì)胞中SHIP-1的表達(dá)與miR-155的表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)（r=-0.445， P=0.014）。
　　結(jié)論：在ITP患者B淋巴細(xì)胞內(nèi)miR-155可能通過沉默B淋巴細(xì)胞負(fù)性調(diào)控因子SHIP-1蛋白的表達(dá)來刺激B淋巴細(xì)胞受體活化，進(jìn)而過度激活自身反應(yīng)性B淋