血小板整合素αIIbβ3拮抗劑對(duì)凝血酶誘導(dǎo)血小板凋亡的調(diào)節(jié)作用研究.pdf

1、背景：血小板是從成熟巨核細(xì)胞上脫落下來的直徑約2-3微米的盤狀小體，在血液循環(huán)中有穩(wěn)定的數(shù)量以及結(jié)構(gòu)，在止血以及血栓形成等過程中起重要作用。近年來，科研人員逐漸認(rèn)識(shí)到血小板凋亡在體內(nèi)外廣泛存在，并且在許多血小板相關(guān)性疾病中具有重要作用?？寡“逯委熓桥R床所需的，其中血小板整合素αIIbβ3拮抗劑能夠阻止血小板膜表面αIIbβ3受體與纖維蛋白原結(jié)合，防止血栓的形成，在臨床抗血小板治療中發(fā)揮重要作用。但是血小板整合素αIIbβ3拮抗劑是否影

2、響血小板凋亡，以及在血小板凋亡中可能的作用有待于進(jìn)一步研究探討。
　　目的：本研究旨在探討體外條件下，血小板整合素αIIbβ3拮抗劑預(yù)孵育血小板后，是否對(duì)凝血酶誘導(dǎo)的血小板凋亡過程發(fā)生影響以及可能產(chǎn)生的調(diào)節(jié)作用。
　　方法與材料：采集18周歲到30周歲健康體檢者靜脈全血（男性8名，女性7名，共15人），全血經(jīng)離心，洗滌后制備成洗滌血小板。洗滌血小板（3×108/ml）加入相關(guān)藥物混勻后分為五組,分別為：（1）陰性對(duì)照組；（2

3、）陽性對(duì)照組；（3）替羅非班0.05μg/ml組；（4）替羅非班0.25μg/ml組；（5）替羅非班0.5μg/ml組。五組血小板混懸液與相關(guān)抗體或染料、刺激劑凝血酶在37℃下反應(yīng)一定時(shí)間，流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組血小板混懸液中的血小板凋亡指標(biāo)線粒體跨膜電位（Mitochondrial inner transmembrane potential,△Ψm）去極化和磷脂酰絲氨酸（Phosphatidylserine, PS）外翻，以及促進(jìn)血小板凋

4、亡的活性氧的產(chǎn)生。
　　結(jié)果：1.與陰性對(duì)照組相比，陽性對(duì)照組中凝血酶誘導(dǎo)的血小板出現(xiàn)明顯的線粒體跨膜電位水平降低，發(fā)生去極化改變（P<0.01），以及血小板膜內(nèi)側(cè)磷酯酰絲氨酸外翻（P<0.01），證實(shí)凝血酶誘導(dǎo)了血小板凋亡的發(fā)生。
　　2.與陽性對(duì)照組相比，三組替羅非班孵育組的血小板線粒體跨膜電位水平均明顯增加，去極化現(xiàn)象減少，表明替羅非班抑制了凝血酶誘導(dǎo)的血小板線粒體跨膜電位去極化，血小板凋亡減輕（P<0.01），同時(shí)血

5、小板膜內(nèi)側(cè)磷酯酰絲氨酸外翻均明顯減少（P<0.01），血小板凋亡相應(yīng)減輕，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。不同濃度替羅非班組組間比較發(fā)現(xiàn)，對(duì)于凝血酶誘導(dǎo)的線粒體跨膜電位去極化的變化以及血小板膜內(nèi)側(cè)磷酯酰絲氨酸外翻改變?nèi)M間沒有明顯差異。
　　3.與陰性對(duì)照組相比，陽性對(duì)照組中促進(jìn)血小板凋亡的活性氧的產(chǎn)生顯著增加（P<0.01），顯示凝血酶促進(jìn)血小板凋亡進(jìn)程。
　　4.與陽性對(duì)照組相比，三組不同濃度的替羅非班孵育組中促進(jìn)血小板凋亡的活性

6、氧的產(chǎn)生均顯著減少（P<0.01），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，顯示替羅非班可以抑制血小板凋亡進(jìn)程。不同濃度替羅非班組組間比較發(fā)現(xiàn)，對(duì)于活性氧產(chǎn)生的影響三組間沒有明顯差異。
　　結(jié)論：體外實(shí)驗(yàn)中刺激劑凝血酶能誘導(dǎo)血小板凋亡的發(fā)生，血小板整合素αIIbβ3拮抗劑孵育血小板后抑制了凝血酶誘導(dǎo)的血小板凋亡指標(biāo)線粒體跨膜電位去極化和血小板膜內(nèi)側(cè)磷酯酰絲氨酸外翻，同時(shí)減少了促進(jìn)血小板凋亡的活性氧的產(chǎn)生，顯示血小板整合素αIIbβ3拮抗劑抑制了凝血酶