精索靜脈曲張(VC)大鼠及其手術(shù)治療后睪丸附睪組織中miR-210和HIF-1α的表達及意義.pdf

1、目的：
　　通過研究miR-210和HIF-1α（缺氧誘導(dǎo)因子-1α）蛋白在精索靜脈曲張大鼠的睪丸、附睪組織中的表達情況及精索靜脈高位結(jié)扎術(shù)后改善情況。分析各組大鼠睪丸、附睪組織中miR-210和HIF-1α蛋白表達情況及相互關(guān)系。同時優(yōu)化手術(shù)造模和精索靜脈曲張高位結(jié)扎手術(shù)方法。探討精索靜脈曲張高位結(jié)扎手術(shù)的意義，探討miR-210和HIF-1α在大鼠精索靜脈曲張致睪丸附睪損傷中可能的分子機制，探討miR-210和HIF-1α是否

2、能成為預(yù)測精索靜脈曲張手術(shù)指征和預(yù)后的指標(biāo)。
　　方法：
　　1.選取7周齡（青春期）雄性SD(Sprague-Dawl)大鼠21只，飼養(yǎng)1周后隨機分為假手術(shù)組（7只）、曲張組（7只）和治療組（7只）。曲張組和治療組大鼠麻醉后上腹部正中切口顯微鏡下縮窄左腎靜脈和左下腹部切口結(jié)扎左精索靜脈與左髂總靜脈間的交通支；假手術(shù)組大鼠手術(shù)操作過程與曲張組相同，但不實施縮窄和結(jié)扎操作，單純關(guān)閉手術(shù)切口，在相同條件下飼養(yǎng)8周；造模術(shù)后8周，

3、在麻醉下測量假手術(shù)組和曲張組大鼠的精索靜脈直徑，切除左側(cè)睪丸（稱重）和附睪，一部分睪丸附睪進行甲醛固定，其余凍存(-80℃)備用；治療組大鼠在麻醉后顯微鏡下進行左精索靜脈高位結(jié)扎術(shù)，繼續(xù)原條件飼養(yǎng)4周，4周后測量精索靜脈直徑和睪丸重量、留取標(biāo)本同假手術(shù)組和曲張組。將甲醛固定睪丸附睪組織進行HE染色，觀察睪丸附睪損傷情況。
　　2.切取睪丸組織和附睪頭部組織，使用micRNA提取試劑盒提取micRNA，反轉(zhuǎn)成cDNA后再進行real

4、-time PCR測定miR-210的表達情況；通過蛋白提取試劑盒提取蛋白，然后進行蛋白印跡（WB），測定HIF-1α蛋白表達情況。
　　3.分析各組睪丸附睪組織miR-210和HIF-1α的表達情況，以及分析各組睪丸附睪組織miR-210和HIF-1α兩者之間的相關(guān)性。
　　結(jié)果:
　　1.每組最終各5只大鼠；病理切片顯示：曲張組和假手術(shù)組相比生精小管內(nèi)生精細胞數(shù)量減少、分布不均勻及炎細胞浸潤，無成熟精子，附睪管上皮

5、細胞減少、成熟精子數(shù)量減少，治療組較曲張組明顯改善；精索靜脈直徑：曲張組和治療組（結(jié)扎術(shù)前）比假手術(shù)組明顯增粗(P＜0.01)，且差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　2．睪丸重量：曲張組比假手術(shù)組重量減輕，治療組比假手術(shù)組減輕(P＜0.01)，兩者均有統(tǒng)計學(xué)意義；治療組比曲張組重量增加(P＞0.05)，但是無統(tǒng)計學(xué)意義。3．睪丸和附睪組織中miR-210和HIF-1α的表達情況：睪丸組織miR-210和HIF-1α的表達，曲張組比假手術(shù)組相

6、對量均增加，治療組比曲張組相對含量均減少(P＜0.01)，且均有統(tǒng)計學(xué)意義；假手術(shù)組與治療組相比變化不明顯(P＞0.05)，均無統(tǒng)計學(xué)意義；各組附睪組織miR-210和HIF-1α的表達差異與睪丸組織一致。4．睪丸和附睪組織 miR-210和 HIF-1α之間的關(guān)聯(lián)性：相關(guān)性分析結(jié)果顯示兩者之間均呈正相關(guān)。
　　結(jié)論:
　　1.精索靜脈曲張可引起大鼠睪丸退行性損傷，生精功能異常，重量減小，附睪管上皮細胞減少、成熟精子數(shù)量減少

7、；精索靜脈增粗。精索靜脈高位結(jié)扎術(shù)后，睪丸的損傷得到修復(fù)，生精功能改善，重量增加但不明顯，附睪精子成熟功能得到改善；精索靜脈萎縮。
　　2．精索靜脈曲張導(dǎo)致左側(cè)睪丸和附睪組織miR-210和HIF-1α表達量均增加；精索靜脈曲張高位結(jié)扎術(shù)后睪丸和附睪組織miR-210和HIF-1α表達量均降低，二者呈正相關(guān)。
　　3．精索靜脈曲張大鼠睪丸附睪組織中 miR-210和 HIF-1α的表達增加，并且miR-210和HIF-1α表