精索靜脈曲張大鼠生精細(xì)胞中TSLC1的表達(dá)及意義.pdf

1、目的：研究精索靜脈曲張對大鼠睪丸以及生精功能的影響，掌握手術(shù)造模技術(shù)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)以及顯微鏡對精子形態(tài)的觀察方法。了解透射電鏡對生精小管形態(tài)學(xué)變化的觀察方法。分析各組大鼠生精細(xì)胞中肺癌腫瘤抑制因子1(Tumor supressor in lung cancer1，TSLC1)表達(dá)情況以及和臨床指標(biāo)間關(guān)系，包括睪丸重量、精子質(zhì)量以及曲細(xì)精管的退行性變化，探討精索靜脈曲張引起不育的潛在機(jī)制。
　　方法：1.選取青春期

2、雄性Sprague-Daw1(SD)大鼠，分別分為4周對照組、4周實驗組；8周對照組、8周實驗組。實驗組通過手術(shù)部分結(jié)扎左腎靜脈造成左側(cè)精索靜脈曲張，對照組大鼠手術(shù)顯露過程與實驗組相同，但不施行血管結(jié)扎，單純關(guān)閉切口，在相同條件下飼養(yǎng)。
　　2.麻醉下切除左側(cè)睪丸，電子天平稱重，將部分曲細(xì)精管做成超薄切片，用透射電子顯微鏡觀察；Megaview數(shù)字化電鏡攝影系統(tǒng)攝片。其余曲細(xì)精管制成生精細(xì)胞懸液，用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)測

3、定TSLC1的表達(dá)。
　　3.取下左側(cè)附睪，放入PBS液中，制備成精子懸液，用Macro計數(shù)板于顯微鏡下計數(shù)，計算精子濃度；另外再取樣本于載玻片上染色，光學(xué)顯微鏡下觀察精子的形態(tài)，記錄其畸形率。
　　4.采用SPSS18.0統(tǒng)計軟件對實驗數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計處理，計量資料進(jìn)行方差分析，兩變量之間的關(guān)系采用Spearman等級相關(guān)分析法。
　　結(jié)果：1.精索靜脈直徑：4周實驗組左側(cè)精索靜脈直徑(0.65±0.04mm)與同期對照

4、組(0.24±0.07mm)相比明顯增粗(P<0.01)；8周實驗組左側(cè)精索靜脈直徑(0.73±0.03mm)與同期對照組(0.21±0.06mm)相比亦明顯增粗(P<0.01)，均有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　2.睪丸重量：4周實驗組左側(cè)睪丸平均重量(1.35±0.29g)與同期對照組(1.57±0.13g)相比減小(P<0.05)；8周實驗組左側(cè)睪丸平均重量(1.05±0.12g)與同期對照組(1.60±0.17g)相比減小(P<0.0

5、1)；8周實驗組左側(cè)睪丸平均重量與4周實驗組相比減小(P<0.01)。
　　3.精液分析：4周實驗組精子濃度(37.54±3.95×106/ml)與同期對照組(90.35±10.58×106/ml)相比減小(P<0.01)；8周實驗組精子濃度(19.81±4.24×106/ml)與同期對照組(92.43±8.31×106/ml)相比減小(P<0.01)；8周實驗組精子濃度與4周實驗組相比減小(P<0.01)。
　　4周實驗組

6、精子畸形率(25.43±1.22％)與同期對照組(5.74±1.01％)相比增加(P<0.01)；8周實驗組精子畸形率(52.50±1.86％)與同期對照組(6.25±1.33％)相比增加(P<0.01)；8周實驗組精子畸形率與4周實驗組相比增加(P<0.01)。
　　4.生精細(xì)胞 TSLC1表達(dá)：4周實驗組(18.51943±0.942876pg/ml)與同期對照組(27.37864±1.29343pg/ml)相比減少(P<0.

7、01)；8周實驗組(14.96392±1.046725pg/ml)與同期對照組(25.56482±1.42657pg/ml)相比減少(P<0.01)；8周實驗組與4周實驗組相比亦減少(P<0.01)。
　　5.電鏡觀察：實驗組與對照組相比，精原細(xì)胞、支持細(xì)胞異常，精子發(fā)育障礙；精母細(xì)胞、精子細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)大量空泡，細(xì)胞核異形，核膜皺縮，核結(jié)構(gòu)不清。頂體形成異常，頂體缺失，或僅有小的頂體。精子尾部線粒體鞘缺失、不完整，或排列紊亂，線