乳鐵蛋白的成骨作用機制及熱處理對其活性影響研究.pdf_第1頁
已閱讀1頁,還剩77頁未讀 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內容提供方,若內容存在侵權,請進行舉報或認領

文檔簡介

1、乳鐵蛋白是一種具有抗菌、抗病毒、免疫調節(jié)等多功能性鐵結合糖蛋白,它廣泛存在于哺乳動物乳汁中,一些外分泌物如淚液、滑液、唾液等也含有少量乳鐵蛋白。近年來發(fā)現(xiàn)乳鐵蛋白對骨生長和代謝的作用逐漸成為研究熱點。本研究從新鮮牛乳中分離純化得到乳鐵蛋白,研究乳鐵蛋白對成骨細胞增殖作用影響,考察乳鐵蛋白對成骨細胞MAPK信號轉導通路影響,同時研究不同加熱處理參數(shù)對乳鐵蛋白成骨活性影響及對成骨細胞MAPK信號轉導通路影響,進而為乳鐵蛋白在工業(yè)化生產中的應

2、用工藝開發(fā)奠定一定的理論基礎。
  本研究以新鮮牛乳為原料,通過脫脂、除酪蛋白、SP Sepharose Big Bead離子交換層析、Superdex200凝膠層析、超濾除鹽濃縮及真空冷凍干燥等一系列過程,最終獲得乳鐵蛋白純品。在純化過程中對Superdex200層析條件進行優(yōu)化,通過優(yōu)化條件來分離純化乳鐵蛋白,得到乳鐵蛋白分子量約為76kDa,乳鐵蛋白純度約為93.82%,得率為68.19%。通過差示掃描量熱法測定得到的乳鐵蛋

3、白熱變性溫度為70.4℃和88.2℃。綜合考慮乳鐵蛋白熱變性溫度及實際生產加工中乳的熱處理參數(shù),設置以下加熱參數(shù):62-65℃加熱處理30min、72℃加熱處理10s、85℃加熱處理10min、95℃加熱處理10min對乳鐵蛋白進行熱處理,進而考察熱處理對乳鐵蛋白活性的影響。
  從新生SD乳鼠中提取成骨細胞,通過形態(tài)觀察、HE染色、堿性磷酸酶染色及礦化結節(jié)染色來鑒定成骨細胞。運用MTT法進行細胞增殖實驗,比較不同加熱處理乳鐵蛋白

4、對成骨細胞增殖影響。研究結果表明未加熱乳鐵蛋白能顯著促進成骨細胞增殖,且在生理濃度(1-100μg/mL)范圍內呈劑量依賴關系。與未加熱乳鐵蛋白對成骨細胞增殖作用相比,62-65℃加熱處理低濃度乳鐵蛋白(1、10、50μg/mL)對成骨細增殖作用無顯著變化,而處理高濃度乳鐵蛋白(1000、1250、1500μg/mL)則會顯著降低對成骨細胞增殖作用;72℃加熱處理乳鐵蛋白對成骨細胞作用,作用24h時,低濃度(1、10μg/mL)對成骨細

5、胞增殖作用顯著提高,作用48、72h時則無顯著變化,72℃加熱處理高濃度乳鐵蛋白(1000、1250、1500μg/mL),作用24h、48h會顯著降低對成骨細胞增殖作用,作用72h則無顯著作用;85℃加熱處理和95℃加熱處理濃度高于50μg/mL乳鐵蛋白都會顯著降低對成骨細胞增殖作用。
  研究乳鐵蛋白對成骨細胞MAPK信號通路影響發(fā)現(xiàn):乳鐵蛋白可通過介導ERK1/2、p38MAPK、JNK亞通路來促進成骨細胞增殖,通過介導ER

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網頁內容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評論

0/150

提交評論